أكثر التداولات لليوم سعر صرف دينار كويتى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف يورو مقابل الدينار الجزائري اليوم - سعر صرف دينار ليبي مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل ريال يمنى اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل درهم مغربي اليوم - سعر صرف دينار تونسي مقابل الدينار الجزائري اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف يورو مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل ليرا تركيا اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف ريال عمانى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل الروبية الاندونيسية اليوم - سعر صرف رينغيت ماليزي مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف دينار ليبي مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف يورو مقابل درهم مغربي اليوم - سعر صرف دينار اردنى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دينار كويتى مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف يورو مقابل ليرا تركيا اليوم - سعر صرف يورو مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف فرانك سويسري مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال عمانى مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف جنية مصري مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف بيير اثيوبيا مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل الدينار الجزائري اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل الدينار الجزائري اليوم - سعر صرف دينار اردنى مقابل شيكل اليوم - سعر صرف دينار اردنى مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف درهم اماراتى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دينار ليبي مقابل يورو اليوم - سعر صرف الوون الكوري مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل ليرا تركيا اليوم - سعر صرف درهم مغربي مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال يمنى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل دينار اردنى اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل دينار ليبي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل روبية سريلانكية اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل درهم مغربي اليوم - سعر صرف ريال قطري مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دينار بحرينى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دولار استرالى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل روبي الهند اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف دينار عراقي مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل ليرة تركية جديدة اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل الروبية الاندونيسية اليوم - سعر صرف دينار عراقي مقابل ليرة تركية جديدة اليوم - سعر صرف جنية مصري مقابل جنية قبرصي اليوم - سعر صرف الجنية الأسترلينى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دينار كويتى مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل دينار كويتى اليوم - سعر صرف يورو مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف دينار ليبي مقابل الدينار الجزائري اليوم - سعر صرف دينار كويتى مقابل ليرا تركيا اليوم - سعر صرف يورو مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف ريال قطري مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف دولار كندى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف جنية مصري مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف ريال قطري مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف درهم اماراتى مقابل درهم مغربي اليوم - سعر صرف رينغيت ماليزي مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل شيكل اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل دينار عراقي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل نيرا نيجيريا اليوم - سعر صرف الوون الكوري مقابل دينار اردنى اليوم - سعر صرف درهم اماراتى مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف يوان الصينى مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل كرونا سويدي اليوم - سعر صرف ليرة تركية جديدة مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل جنيه سوري اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل درهم اماراتى اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل ريال يمنى اليوم - سعر صرف يورو مقابل دينار كويتى اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل بيزو فلبينى اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل ليرة تركية جديدة اليوم - سعر صرف الدينار الجزائري مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف ليرا تركيا مقابل ريال سعودي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل موريشيوس روبية اليوم - سعر صرف ريال عمانى مقابل دينار تونسي اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل الوون الكوري اليوم - سعر صرف اونصة الذهب مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف ليرة تركية جديدة مقابل دينار ليبي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل رينغيت ماليزي اليوم - سعر صرف ليرة تركية جديدة مقابل الدينار الجزائري اليوم - سعر صرف دينار ليبي مقابل الوون الكوري اليوم - سعر صرف دينار كويتى مقابل ريال قطري اليوم - سعر صرف دينار بحرينى مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف ين يابانى مقابل جنية مصري اليوم - سعر صرف دينار ليبي مقابل درهم مغربي اليوم - سعر صرف يورو مقابل دينار عراقي اليوم - سعر صرف دولار امريكي مقابل دينار عراقي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل جنية أفغانى اليوم - سعر صرف كرونا سويدي مقابل دينار عراقي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل تاكا بنجلاديش اليوم - سعر صرف جنية مصري مقابل كرونا سويدي اليوم - سعر صرف ريال سعودي مقابل الوون الكوري اليوم - سعر صرف CFA الفرنك (BCEAO) مقابل دولار امريكي اليوم - سعر صرف دولار استرالى مقابل جنية مصري اليوم -
أعلانات الحراج We Have Best Team Of Marble Polishing - IGNIS Washing Machine FL 500 - طقم كنب - لابتوب لينوفو جديد للبيع - بيع ديبلاكس ببومهل البساتين - Urgent jobs get your opportunity now - فني ديكورات دهانات وجبسيات كل ماهو جديد في عالم الديكور - نقل عفش مع الفك والتركيب داخل وخارج الرياض جوال 0546117004 - ارض500م شمال كردفان مدينه الابيض - طرابلس - أبحث عن منزل للكراء في بنزرت - Isuzu 2016 - باتري كوري جديد - زينكو مع تيوبات - ماكينة الشمع لإزالة الشعر - We have everything you do from makeup to hairdressing - كاميرا الاستكشاف الجديدة - فتاة وخطيبها نبحث عن عمل - باص زلومه تويوتا 2007 جديد - الفنطاس - استقبال اطفال بالسالميه - هوندا بلريود موديل 1993 - تصفيه سيبر اترك عرضك - معه 2يدين و2 دسكات - للبيع ثلاجة عرض حلويات النوع إيطالي بحاله جيده التلفون 66518106 - ماكنات نجارة - شاريو 619سم هيدروليك Altendorphe - شاريو و مكنة تقشيط - Urgent Sale!!! 18k pure gold bangle bracelet - number plates - شروة احذية بلاستيك - فستان مستعمل من فانسي سعر الشراء 2500لبسه وحده للبيع ب1500 مقاس 14 المنطقه الشرقيه - عطور زيتية دات جودة عالية ، فوارغ خليجية وفوارغ كوبي عالأصلي - مقاول بشيك مصدق(طرابلس فقط) - للبيع عدد 7 مكيف استعمال 3 اشهر فقط - جميع المزايا ...معاد الرباعي - هاتف ستار لايت - شقه بمجمع آراك جديده صباح السالم قظ£ - فرشنر موديل 2008 - مطلوب ايفون سكس مقفول ايكلود - مطلوب سايق نساف سكس 32 متر موديل 2003 - ام الهيمان & الرقه & هديه & جابر العلى & القصور - محرك دايو سيلو - بسكليت جنط 20 كوبرة بريك دعسة(أجر ) - باص عفريت مديل 2009 للبيع مستعمل نظيف ب240000 - استراحه في القربولي بعد العطايا - اكسبرس expres - ريف دمشق قطنا قلعة جدنل 2 دونم - POS Machine Hardware & Software - sugarbearhair vitamins - فيتامين شوقر بير هير - كنب كلاسيكي مع الطاولات والسجاد -
الجديد r for data science - الصلاة الصلاة - كيف ازرع النعناع في المنزل ؟ - فوائد التمر والحليب - كيف توفر العديد من المال على نفسك ؟ - كيف تبداء بمشروع صغير وناجح ؟ - كيف تصبح غنياً ؟ - كيف توفر المال ؟ -
آخر المشاهدات هاتف وعنوان مطعم الطاهي - الخبراء, القصيم - قبيلة الهزازي أقسام قبيلة الهزازي - هاتف وعنوان مطعم سعيد حمدان - الباحه - التهاب الجلد الدرهمي الأسباب - خليف بن دواس وفاته - جامعة لفوف الطبية الوطنية بأسم دانيلا هاليتسكوهو تأريخ - هاتف وعنوان مطاعم البخاري وفروعه - الفيصليه, نجران - هاتف وعنوان مطعم سعيد حمدان - الباحة - الشروط المطلوب استيفائها للحصول على ترخيص نقل البضائع والمهمات بأجر بالسعودية - جيمس دين (ممثل إباحي) حياته المبكرة - طريقة تحضير تتبيلة دجاج مشوي على الفحم بالصور - هواتف مستشفى ضبــــاء و معلومات عنها فى بتبــــوك بالسعودية - هاتف وعنوان مطعم الشباب - الفيصليه, نجران - المحظرة الطالب والمنهج - كسر (رياضيات) أنواع الكسور - هاتف وعنوان مستوصف المشافي - الهفوف, الاحساء - جشتية نشأة الطريقة الجشتية في هراة - طريقة عمل سندويش تويستر بيتي الذ من كنتاكي لا تفوتك - الشروط المطلوب استيفاءها للحصول على رخصة تشغيل لشاحنة فردية بالسعودية - هواتف دار الملاحظة الاجتماعية بالرياض ومعلومات عنها بالسعودية - قائمة شخصيات كابتن ماجد الشخصيات - كليندامايسين/تريتينوين آلية التأثير - ريم علي (ممثلة) حياتها - هاتف وعنوان مطعم شاميات - شقراء, محافظات الرياض - وصفة لعلاج سلس البراز بالاعشاب الطبيعية - هواتف مكتب المنصور للإستشارات الهندسية ومعلومات عنه بالسعودية - هاتف وعنوان مكتب المياز للإستقدام - خميس مشيط, عسير - فرط ضغط الدم الكاذب طالع أيضا - جامعة الرباط الوطني (السودان) الكليات - هاتف وعنوان مشغل كان للسيدات - الخليج, مدينة الرياض - بيت مغنيز (إب) مراجع وروابط خارجية - طريقة عمل بتر تشكين من منال العالم - هيدروكسيد البوتاسيوم التحضير - نظام تشغيل الهاتف المحمول منصات البرمجيات الحالية - هاتف وعنوان مطعم قصر الفطائر - الفيصليه, نجران - حمد بن عبد العزيز السويلم سيرته - إدارة النوادي والفنادق للقوات المسلحة (مصر) دور القوات المسلحة - يحيى السويقي عائلته - هاتف وعنوان مطعم المنير للمشويات الطازجة - الهفوف, الاحساء - هاتف وعنوان مطبخ سويد - الطائف المركزي, الطائف - هواتف وأرقام الدكتور فيصل الصافي والعنوان - لعبة الزقطة و اللقطة - جامعة قاردن سيتي الكليات - هاتف وعنوان مستوصف الجزيرة الطبي - تبوك - هاتف وعنوان مطعم السليم - المبرز, الاحساء - المئة قصة المسلسل - هاتف وعنوان مطعم الصخرة - الملز, مدينة الرياض - هاتف وعنوان مستوصف الأنفال - شقراء, محافظات الرياض - طريقة عمل وصفة كبة الكتل من اكلات منال العالم - نترات الزنك الخواص - هاتف وعنوان المستوصف العالمي لطب الأسنان - العزيزيه, مدينة الرياض - هاتف وعنون مؤسسة بن شيهون للتجارة - شارع الغرابي, مدينة الرياض - طريقة اعداد كفتة القرنبيط بالذ طعم خطوة بخطوة - هواتف مكتب مكافحة التسول بالدمام ومعلومات عنها بالسعودية - هاتف وعنوان مطاعم الجبل الأخضر - ابها, مدينة ابها - العقيدة السرية الكتاب الأول - الرفراكتوميتر نظرية العمل - هاتف وعنوان شركة ساكو - الخبر, مدينة الخبر - المريض الإنكليزي الحبكة - هاتف ومعلومات عن شركة طيران الشرق الأوسط / الخطوط اللبنانية بالرياض - هاتف وعنوان مطاعم البتك - الفيصليه, نجران - هاتف وعنوان مستشفى العدواني العام - الطائف المركزي, الطائف - هاتف وعنوان مؤسسة أريج للديكور - بريده, القصيم - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج امراض القدم والارجل بالاعشاب - هاتف وعنوان محل الفارسي ديرسن لملابس الأطفال - سلطانه, المدينة المنورة - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج الصدفية بالاعشاب - كلية ابن سينا رسوم الكلية - هاتف وعنوان مستر بيتزا بيتزا - المجمع, الدمام - هاتف وعنوان محل اللقماني للغاز - رابغ, جدة - التهاب فم نيكوتيني التشخيص - نظرية هوفستد للأبعاد الثقافية تاريخ ومنهجية البحث - قائمة الحروب 1990 - 2002 - هاتف وعنوان مستوصف الفيحاء - النسيم, مدينة الرياض - اسباب مرض تشنج العمود الفقري - ألم عصبي قذالي الأسباب - بندر بن محمد بن عبد الرحمن آل سعود اشقاؤه - مدرسة الباسل للمتفوقين (حلب) - ميزانية و تكاليف ودراسة جدوى مشروع إنتاج الصابون السائل - هاتف وعنوان مطعم الوجبة - ينبع - نظرية الغرس الثقافي تعريف - كلوروفينول الإستخدامات - هاتف وعنوان مطعم مطبقاتي - الجامعه, الاحساء - كلية النيل الأبيض للعلوم والتكنولوجيا برامج الكلية - هاتف وعنوان مستوصف العدواني الطبي - المنصور, مكة المكرمة - إصابة الجهاز التناسلي للمرأة بالدرن - محمد بن الدناه الأجودي الشنقيطي نسبه - هاتف وعنوان كافكو للمطابخ - الهفوف, الاحساء - كينك دوت كوم - لغز إدوين درود - صراع العروش (الموسم الثاني) ملخص الموسم - نظرية فيسبر نظرة عامة - هاتف وعنوان مستشفى الملك عبد الله بن عبد العزيز - بيشه, عسير - تكامل مثلثي تكامل الجيب - هاتف وعنون شركة بن زقر للاطارات - المطلق, الدمام - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج القولون بالاعشاب - هاتف ومعلومات عن مؤسسة أحمد حماد الشمري لتأجير السيارات بالرياض - هاتف وعنوان مؤسسة محمد عمر باعشن التجارية - باب مكه, جدة - مديح نبوي خصائص المديح النبوي - اسئلة تدور فى ذهن كل حامل - تقلصات قوية أسفل البطن في الشهر الخامس من الحمل فما العلاج؟ - طريقة اعداد مخلل الثوم بزيت الزيتون بالذ طعم خطوة بخطوة - عدد السعرات الحرارية في الكباب والطاقة والقيمة الغذائية - قطار الأناناس السريع (فيلم) القصة - هاتف وعنوان مستوصف الحمد الطبي - سكاكا, الجوف - قرش ملاك المظهر والبيولوجيا - وادي السير الموقع - هاتف وعنوان مستشفى الجدعاني - الصفا, جدة - بدر المسباح أعماله - مولاي بن شريف مولده ونشأته - هاتف ومعلومات عن مطاعم نوير بالرياض - هاتف وعنوان مطعم محمد عاطي القرني - سبت العلايا, عسير - [طب بديل ] فوائد زيت الكزبرة بديل للمضادات الحيوية الطبيعية - مواضيع صحية - معلومات هامة عن سلالة دجاج الجميزة - هاتف وعنوان مستوصف السلامة الطبي - خميس مشيط, عسير - هاتف وعنوان عيادة دكتور محمد الدويك - العليا, الرياض - هاتف وعنوان مطعم ومطبخ الجش - ام الحمام, الدمام - [بحث جاهز للطباعة] أجدد بحث عن كيفية كتابة تقرير ميداني - - اسباب الفتق (الفتاق) عند الاطفال حديثى الولادة - هاتف وعنوان مستوصف المغلوث الطبي - المبرز, الاحساء - مرض هبوط البطن اعراض المرض - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج مشاكل الدوره الشهرية و الحيض بالاعشاب - هواتف الشركة الاحديه للمقاولات والتجاره والصناعه المحدوده ومعلومات عنها بالسعودية - علي الهويريني السيرة الذاتية - هاتف وعنوان مطعم ديرتي - حائل - فلورين سالام حياته الغنائية - هاتف وعنوان مستشفى الفريح التخصصي - بريده, القصيم - اختبار حركية المريء دواعي اجراء الاختبار - هاتف وعنوان مطعم كلك نظر - سكاكا, الجوف - هاتف وعنوان مؤسسة أحمد أبوبكر بادحمان التجارية - المجمع, جدة - سونلغاز تاريخها - متلازمة كاودن الوراثة - هاتف وعنوان مطعم باجنيد - ابها, مدينة ابها - أصدقاء للأبد (رواية) نبذة قصيرة - هاتف وعنوان المستشفى السعودي الألماني ,عسير - خميس مشيط, عسير - هاتف وعنوان روزانا للخياطة النسائية - النسيم, مدينة الرياض - كافوري (خرطوم بحري) الموقع - السطارة تاريخ سطارة - طريقة عمل طبخة اليبرق السوري من مطبخ منال العالم - طريقة عمل اندومي الطعم الشهي بطريقتي من مطبخي بالصور - هاتف وعنوان مطعم بابا خان- الخبر, مدينة الخبر - طريقة هورنر وصف الخوارزمية - ماري لو ريتون حياتها الشخصية - وصفة هائلة من الطب البديل لعلاج فقدان شهية الطعام وفتح الشهيه للاكل بالاعشاب - إدارة شؤون العاملين بالقوات المسلحة (مصر) مديري الإدارة - هاتف وعنوان مكتب المفاوض الدولي للإستقدام - المبرز, الاحساء - هاتف وعنوان المستشفى الأهلي - خميس مشيط, عسير - بندقية إم-4 القصيرة مواصفات عامة - رياح شيلي (شهيلي) - هاتف وعنوان مطبخ ومطعم الوليمة - الدرعيه, مدينة الرياض - ليسيه باسيه أنظر أيضاً - هاتف وعنوان مطعم ومعجنات لطيف - محاسن, الاحساء - هاتف وعنوان مستوصف التخصصي لطب الأسنان - حائل - طريقة تحضير فريكة ورز من الشيف منال العالم - هاتف و عنوان مستشفى الملك فيصل و معلومات عنها بالطـــائـف بالسعودية - محول تفاضلي متغير خطي مبدأ العمل - ثمان نظريات للتعلم والأداء - الكلية العسكرية لعلوم الإدارة (مصر) - هاتف وعنوان مطعم زاكي - ابها, مدينة ابها - العلاج الجراحي لإصلاح انحناء القضيب واستكمال مجرى البول - بشير غنيم عن حياته - عبيد كرومي بداية حياته - كفر حكيم تاريخ القرية - هاتف وعنوان مصنع الخير لشبك الأسوار والأسلاك الشائكة - النزله, جدة - هاتف و معلومات عن مطعم زين الفطائر التركية بالمدينة المنورة - هل يجب اجراء عملية لقطع الرباط الصليبي؟ ومتى؟ - ريم الرياحي - هواتف و عناوين وزارة الخارجية - الرياض بالمملكة العربية السعودية - هاتف وعنوان مستوصف الحقيل لتقويم وطب الأسنان - الخبر شمال, مدينة الخبر - مخاطر صاعق الحشرات الكهربائي - الدبورة (قصص مصورة) - كعب بن زهير حياته - كيمبرلي ويليامز بيزلي حياتها - ستويا - وصفة تساعد على التئام الجروح: بسرعة بخلطات الاعشاب - وصفات تعمل بالمنزل - فرط ثنائي أكسيد الكربون في الدم الأسباب - كمال مسعودي حياته - مصطفى خزندار - نظام بلوري مكعب شبكات تبلور برافيه للمكعب - لارا طماش حياتها ومشوارها المهني - أيميل ساين حياتها - هاتف وعنوان مطعم الطربوش - الفيصليه, نجران - فيزا عمل للسعودية ,, شروط واجراءات استخراجها - اسباب وعلاج كبر محيط راس الطفل او كبر حجم الرأس عند الاطفال - طريقة تحضير الكليجة العراقية الرائعة بالذ طعم خطوة بخطوة - هاتف وعنوان مطعم الاموي - العزيزيه, مكة المكرمة - مزايا أن تكون خجولا (رواية) الأدب - هاتف وعنوان المطابخ السعودية - الباحه - هاتف وعنوان مطعم الشجرة - ابها, مدينة ابها - هاتف وعنوان مستوصف سنمار الطبي - النسيم, مدينة الرياض - قنفذية رفيعة الأوراق البيئة والانتشار - المحمدية (ولاية معسكر) التسمية - طريقة تحضير تغميسو tiramisu خطوة بخطوة - مركز البحوث الفنية والتطوير للقوات المسلحة (مصر) - هاتف و معلومات عن مركز وقاية الصحي بالمدينة المنورة - طريقة تحضير يلنجي او ورق عنب بالزيت من الشيف منال العالم - منشورات الزمن كتاب الجيب - هاتف وعنوان مطاعم أنعام الإحساء للحفلات - المبرز, الاحساء - الشروط الواجب توفرها للحصول على تأشيرة الحج من السفارة السعودية بالمغرب - أمدوكال معالم المدينة - طريقة تحضير كيك بدون بيض وصفة عجيبة بطريقة سهلة -
اليوم: الجمعة 20 يوليو 2018 , الساعة: 9:26 م
آخر تحديث للموقع قبل 2 يوم و 21 ساعة

اسعار صرف العملات ليوم الجمعة 20/07/2018


اعلانات
موضوع اليوم
r for data science r for data science data science with r bootcamp in riyadh
0 تعليق
هنا يظهر الأكثر مشاهدة خلال 24 ساعة

لطخة ويسترن خطوات لطخة ويسترن

نشر قبل 1 سنة و 9 شهر 286 مشاهدة


اعلانات
شاركنا رأيك بالموضوع

خطوات لطخة ويسترن


تحضير الأنسجة



يمكن أخذ العينات من أنسجة كاملة أو من زراعة الخلايا. يتم كسر الأنسجة الصلبة ميكانيكيًا، في أغلب الأحيان، باستخدام خلاّط (لإحجام عينات كبيرة)، باستخدام مجنس homogenizer (للأحجام الأصغر)، أو الصوتنة بالصوتنة Sonication. يمكن كسر وفتح الخلايا بإحدى الطرق المذكورة أعلاه أيضًا.


يمكن توظيف العديد من المنظفات والأملاح والمحاليل لتشجيع التكسر الخلوي ولإذابة البروتينات. يتم أيضًا إضافة مثبطات (موانع) البروتييزات والفسفاتازات Protease and Phosphatase Inhibitors وذلك لمنع تآكل العينة بإنزيماتها الخاصة.


يتم استخدام مجموعة من التقنيات الميكانيكية والكيمياحيوية (البايوكيميائية) من ضمنها أيضًا العديد من أنواع التصفية و طرد مركزي الطرد المركزي لفصل أجزاء أو عضيات معينة من الخلايا.


image SDS-PAGE sample.png


الفصل الكهربائي للهلام


مفصلة فصل كهربائي للهلام


يتم فصل بروتينات العينة باستخدام فصل كهربائي الفصل الكهربائي . فصل البروتينات قد يكون باستخدام النقطة متوازنة الكهربة Isoelectric point (pI)، الوزن الجزيئي، الشحنة الكهربائية، أو مجموعة من هذه العوامل. طبيعة الفصل تعتمد على طريقة معالجة العينة وطبيعة الهلام.


إلى حد الآن، الطريقة الأكثر شيوعاً للفصل الكهربائي للهلام توظف هلامات متعدد الأكريلامايد polyacrylamide ومحاليل تحتوي على كبريتات دوديكل الصوديوم Sodium Dodecyl Sulfate (SDS).


SDS-PAGE أي (الفصل الكهربائي لهلام كبريتات دوديكل الصوديوم متعددالأكريلامايد SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis) تحافظ على سلسلة البروتيات في حالة مفككة denatured state حالماً يتم معالجتهم مع عوامل اختزال قوية للقضاء على الأشكال الثانوية والثالثية. (مثل تحويل الروابط ثنائية الكبريت S-S إلى SH و SH) وبذلك يسمح لفصل البروتينات حسب وزنهم الجزيئي. يتم تغطية البروتينات في العينة بكبريتات دوديكل الصوديوم السالبة الشحنة ونقلها إلى القطب الكهربائي الموجب الشحنة خلال شبكة الأكريلامايد في الهلام.

البروتينات الصغيرة تهاجر أسرع خلال هذه الشبكة وبذلك يتم فصل البروتينات حسب الحجم (عادة ما يتم قياسها بالكيلودالتون، kD، kiloDaltons). تركيز الأكريلامايد يحدد دقة الهلام - كلما زاد تركيز الأكريلامايد كلما زادت دقة البروتينات ذات الأوزان الجزيئية العالية. البروتينات تهاجر ببعد واحد خلال الهلام لأغلب اللطخات.

image SDS-PAGE Electrophoresis.png


WB-gel الهلام ويلاحظ فيه الدرج بصورة حزم زرقاء اللون بسبب الصبغة الزرقاء كوماسي بلو Coomassie Blue

يتم تحميل العينات في < >آبار في الهلام. يتم حفظ إحدي الأسطر للـ < >درج أو < >العلامات، وهما خليط متوفر تجارياً من عدة بروتينات معروفة الوزن الجزيئي، عادة ما تكون مصبوغة لكي تُظهر حزم ملونة مرئية.


أحد الأمثلة على الدرج، هو درج الأوزان الجزيئية الكامل المدى لشركة GE (كما في الشكل). عندما يتم تطبيق فرق الجهد على الهلام، تهاجر البروتينات ضمنه بسرع مختلفة. هذه المعدلات الزمنية المختلفة للتقدم ( حركة فصل كهربائي حركات الفصل الكهربائي المختلفة) تُفصل إلى < >حُزم ضم كل < >سطر.



من الممكن أيضاً استخدام هلام ثنائي الأبعاد الفصل الكهربائي ثنائي الأبعاد الذي يفصل البروتينات من عينة واحدة في بُعدين. البروتينات تفصل بحسب النقطة متوازنة الكهربة (تركيز أيونات الهيدروجين pH الذي تكون فيه الشحنة متعادلة) في البعد الأول، وبحسب الوزن الجزيئي في البعد الثاني.


النقل



من أجل جعل الوصول للبروتينات أسهل للاكتشاف بالأجسام المضادة، يتم نقلهم من الهلام إلى غشاء مصنوع من النيتروسيليوز أو الـPVDF. يتم وضع هذا الغشاء فوق الهلام، ووضع مجموعة من طبقات أوراق الترشيح فوق ذلك. ثم يتم وضع الطبقات كلها في محلول يقوم بالتنقل إلى الأعلى عبر الأوراق بالخاصية الشعرية Capillary action، جالباً البروتينات معه إلى الغشاء.


ومن الطرق الأخرى لنقل البروتينات تدعى اللطخة الكهربائية وتستخدم تياراً كهربائي لسحب البروتينات من الهلام إلى الغشاء.


البروتينات الآن نُقلت من داخل الهلام إلى سطح غشاء من النيتروسيليلوز أو PVDF مع ثباء الترتيب التي كانت البروتينات عليه داخل الهلام. ويكون ناتج هذه العملية، هو عرض البروتينات على سطح رقيق للاكتشاف (انظر أسفلاً). كلا نوعي الغشاء (نيتروسيليلوز أو PVDF) يتم اختيارهم لخاصية الالتصاق غير المحدد بالبروتيات (أي أنهم يلتصقون بأي بروتين بصورة متساوية). التصاق البروتينات مبني على تفاعلات مصابة بفوبيا الماء hydrophobic interactions)، بالإضافة إلى التفاعلات المشحونة بين الغشاء والبروتين. إن أغشية النيتروسيليلوز تكون أقل كلفة من الـ PVDF، ولكنهم هشة أكثر ولا تستطيع الوقوف لتحقيقات مجددة reprobes كثيرة.Renart J, Reiser J, Stark GR. Transfer of proteins from gels to diazobenzyloxymethyl-paper and detection with antisera a method for studying antibody specificity and antigen structure , < >Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A, 1979 Jul 76(7) 3116-20. PMID   91164] [http //www.pnas.org/cgi/content/abstract/76/7/3116 abstract




image Western blot transfer.png


التأثير الكلّي والموحّد لنقل البروتين من الهلام إلى الغشاء يمكن التأكد منه بصبغ الغشاء بصبغة كوماسي Coomassie أو بونسو س Ponceau S. كوماسي هي الصبغة الأكثر حساسية من الصبغتين، بالرغم من أن سهولة ذوبان بونسو س في الماء تجعله أسهل للإزالة لاحقاً والتحقق من الغشاء كما في أدناه.
Towbin H, Staehelin T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets procedure and some applications < >Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A, 1979 Sep 76(9) 4350-4. PMID   388439] [http //www.pnas.org/cgi/content/abstract/76/9/4350 abstract




السد


بما أنه تم اختيار الغشاء لقابليته على الالتصاق بالبروتينات، وكلاً من الأجسام المضادة والأهداف هما بروتينات، يجب إتخاذ إجراءات خاصة لمنع التفاعلات بين الغشاء والجسم المضاد المستخدم لاكتشاف البروتين الهدف. يتم سد الالتصاق غير المحدد عن طريق وضع الغشاء في محلول مخفف من بروتين - عادة ما يكون هذا البروتين هو ألبومين مصل البقر Bovine Serum Albumin المعروف بالـ BSA أو حليب من غير دهون (كلاهما ليسا مكلفان)، مع مقدار صغير من منظف مثل توين 20 Tween. البروتين في المحلول المخفف يلتصق بالغشاء في كل الأماكن الغير محتوية على البروتينات الهدف. وبهذا، عندما يتم إضافة الجسم المضاد، لن يكون هناك مكان له ليلتصق غير على مواقع الالتصاق على البروتين الهدف المحدد. هذا يقلل التشويش في النتيجة النهائية للطخة ويسترن، ويؤدي إلى نتائج أوضح، ويقضي على النتائج الإيجابية المزيفة.


الاكتشاف


خلال عملية الاكتشاف، يتم التحقق من وجود البروتين المطلوب على الغشاء عن طريق جسم مضاد معدل مرتبط بإنزيم مراسل، الذي عند وضع مادة معينة عليه يسبب تفاعل لوني ويقوم بإنتاج لون معين. ولعدة أسباب، فإن هذه الخطوة تتم بخطوتين، بالرغم من أن الآن يوجد طرق اكتشاف ذات خطوة واحدة لبعض الاستخدامات.


الخطوتين


  • الجسم المضاد الأولي


  • يتم تكوين الأجسام المضادة عندما يتم عرض البروتين المطلوب (أو جزءاً منه) على المستضيف أو خلايا المناعة المزروعة. عادةً، يكون هذا جزءاً من الاستجابة المناعية، ولكن هنا يتم حصد الأجسام المضادة واستخدامها كأدوات اكتشاف دقيقة وحساسة تلتصق بالبروتين مباشرة.


    بعد عملية السد، يتم احتضان الغشاء في محلول مخفف من الجسم المضاد الأولي (عادة بتركيز بين 0,5 ميكروغرام /مل إلى 5 ميكروغرام/مل) مع التحريك الخفيف. بشكله النموذجي، يحتوي المحلول على محاليل ملحية مع نسبة صغيرة من المنظفات، وأحياناً مسحوق حليب أو ألبومين مصل البقر BSA. يمكن وضع محلول الجسم المضاد والغشاء معاً واحتضانهما لأي فترة بين 30 دقيقة إلى عبر الليل. ويمكن أيضاً احتضانهما في درجات حرارة مختلفة، حيث تكون الدرجات الدافئة أكثر محفزة على الالتصاق (لكلا نوعي الالتصاق، الالتصاق المحدد والالتصاق الغير محدد التشويش ).


  • الجسم المضاد الثانوي


  • بعد تنقيع الغشاء أو غسله لإزالة الأجسام المضادة الأولية الغير ملتصقة، يتم إضافة جسم مضاد آخر للغشاء، موجه نحو جزء خاص-لنوع species-specific الجسم المضاد الأولي. وهذا يعرف بالجسم المضاد الثانوي، وبسبب خواصه المستهدِفة، يتم تسميته بـ ضد-الفأر ، ضد-العنز ، ضد-الجرذ ، الخ. الأجسام المضادة تأتي من مصادر الحيوانات (أو زراعة خلايا هيبريدوما حيوانية)؛ فالجسم المضاد الثانوي ضد-الفأر سيلتصق لأي جسم مضاد أولي مصدره الفأر. وهذا يسمح لتوفير المصاريف بالسماح لكل المختبر من استخدام مصدر واحد من جسم مضاد منتج بكثرة، ويوفر نتائج منسقة أكثر بكثير. عادة ما يكون الجسم المضاد الثانوي مرتبط بجزيئة بايوتين أو إلى إنزيم مراسل مثل فسفاتاز قلوي Alkaline phosphatase أو بيروكسيداز الفجل الحار Horseradish peroxidase. هذا يعني أن عدة أجسام مضادة ثانوية ستلتصق بجسم مضاد أولي واحد وتقوم بتعزيز الإشارة للاكتشاف.

    image Western Blot binding.png


    غالباً ما يتم استخدام جسم مضاد ثانوي مرتبط ب بيروكسيداز الفجل مع عامل مضيء كيميائي، وينتج التفاعل بينهما ضوءاً بمقدار كمية البروتين. يتم استخدام طبقة حساسة من الفيلم الفوتوغرافي لخلق صورة للأجسام المضادة الملتصقة باللطخة.


    كما في إجراءات إيلايزا الإيلايزا إيلايزبوت الإيلايزبوت ، يمكن تزويد الأنزيم بجزيئة التي يحولها الإنزيم إلى ناتج تفاعل ملون يمكن رؤيته على الغشاء.


    البديل الثالث هو استخدام علامة مشعة بدل إنزيم متصل بالجسم المضاد الثانوي، مثل ربط بروتين يلتصق بالأجسام المضادة (مثل بروتين أ من العنقودية Staphylococcus) نظير بنظير مشع من يود اليود . ولكن بما أنه الطرق الأخرى هي أكثر أماناً، وأسرع وأرخص، قلّ ما يتم استخدام هذه الطريقة الآن.


    الخطوة الواحدة


    تأريخياً، كانت عملية التحقق تُجرى بخطوتين وذلك بسبب السهولة النسبية لإنتاج أجسام مضادة أولية وثانوية من ناحية المرونة، وأيضاً يضيف خطوة تكبير للإشارة لعملية الاكتشاف.


    نظراً للقدرة الإنتاجية العالية لتحليل البروتينات وانخفاض حدود الإشارة المطلوبة للكشف، تم تطوير طرق تحقُّق ذات خطوة واحدة والتي تستطيع أن تحدث بصورة أسرع مع تقليل استخدام المستهلكات. وهذا يتطلب جسم مضاد ملتقط الذي يتعرف على البروتين المطلوب ويحتوي على علامات اكتشاف/التقاط، وغالباً ما يكون هناك ملتقطات بروتينات مؤشرة للبروتينات المؤشرة Protein tags. يتم احتضان الملتقط الأولي مع الغشاء بطريقة مشابهة للجسم المضاد الأولي في طريقة الخطوتين، ومن ثم يكون جاهز للكشف بعد سلسلة من خطوات الغسل.


    Blotautoradiogram.png frame لطخة ويسترن باستخدام طريقة الاكتشاف المشع


    التحليل


    بعد أن يتم غسل الملتقطات الغير ملتصقة، تصبح لطخة ويسترن جاهزة للاكتشاف عن طريق الملتقطات الملتصقة بالبروتين المراد اكتشاف وجوده أو عدمه. في المصطلحات العملية، لا تُظهر كل لطخات ويسترن البروتين بصورة حزمة واحدة فقط على الغشاء.

    يتم أخذ تقديرات الحجم عن طريق مقارنة الحزم المكتشفة بحزم الدرج المصبوغة التي تم تحميلها عند خطوة الفصل الكهربائي. يتم إعادة هذه العملية لبروتين هيكلي، مثل الأكتين أو التيوبيولين، الذي لا يجب تغيير تركيزه بين العينات. كمية البروتين الموجودة تتم مقارنتها بالبروتين الهيكلي لكي يتم السيطرة على المجموعات العدة. هذه الطريقة تؤكد تصحيح التغييرات الدارجة بسبب عدم انتقال البروتين أو وجود أخطاء في التجربة.


    الاكتشاف اللوني Colorimetric detection


    طريقة الاكتشاف اللوني تعتمد على احتضان لطخة ويسترن مع المادة التي ستتفاعل مع الإنزيم المراسل (مثل بيروكسيداز البيروكسيداز Peroxidase) الذي يكون مرتبط بالجسم المضاد الثانوي. هذا يحول الصبغة الذائبة إلى شكل غير ذائب بلون مختلف والتي تترسب قرب الإنزيم وبالتالي تصبغ غشاء النيتروسيليلوز. يتم إيقاف تحميض اللطخة عندها عن طريق غسل الصبغة الذائبة. يتم تحليل كمية البروتينات باستخدام قياس الكثافة densitometry (أي ما هي كثافة البقعة/الصبغة) أو قياس الضوء spectrophotometry.


    الإضاءة الكيميائية Ch iluminescence




    تعتمد طريقة الاكتشاف بالإضاءة الكيميائية على احتضان لطخة ويسترن مع المادة التي تضيء عندما تتصل بالجزيء المراسل على الجسم المضاد الثانوي. وعندها يتم التقاط الضوء باستخدام فيلم فوتوغرافي ، ومؤخراً باستخدام كاميرات سي سي دي CCD cameras تلتقط صورة رقمية للطخة ويسترن. هذه الصورة يتم تحليلها باستخدام مقياس الكثافة الذي يحلل كمية الصبغة البروتينية النسبية ويقوم بالتحليل الكمي عن طريق الكثافة الضوئية. يوجد برامج جديدة تساعد على تحليلات البيانات بصورة أخرى مثل تحليل الوزن الجزيئي إذا تم استخدام مقاييس صحيحة. يعتبر ما يسمى ب المضيء الكيميائي المحسن Enhanced ch iluminscent أو ECL هو من ضمن أكثر الطرق حساسية للاكتشاف التحليلي للطخة ويسترن.


    image Western blot ch iluminescent detection.png



    الاكتشاف المشع Radioactive detection


    العلامات المشعة لا تحتاج إلى مواد إنزيمية، ولكن فقط وضع أفلام أشعة سينية طبية مباشرة على لطخة ويسترن والذي يقوم بخلق أجزاء غامقة على الفيلم تعود إلى حزم البروتينات المطلوب كشفها (انظر الصورة). قلت أهمية طرق الاكتشاف المشع، بسبب كونها مكلفة، ولها أخطار صحية عالية، كما أن المضيء الكيميائي المحسن ECL يعتبر بدل مفيد جداً.


    الاكتشاف الفلوري Fluorescent detection


    يتم تحفيز الملتقط ذو العلامات الفلورية بواسطة الضوء والانبعاث من التحفيز وبذلك يتم الاستدلال عليه بواسطة متحسس ضوئي مثل كاميرا سي سي دي المزودة بمرشح باعث مناسب حيث يقوم بألتقاط الصورة الرقمية للطخة ويسترن ويقوم بالسماح لتحليل بيانات أخرى كالوزن الجزيئي والتحليل الكمي للطخة ويسترن. يعتبر الملتقط الفلوري من بين أكثر الطُرق حساسية لتحليل اللطخة.


    التحقق الثانوي


    أحد الاختلافات الكبيرة بين غشائي النيتروسيليلوز و PVDF يعود إلى قابلية كل منهم على القيام بـ تعرية للأجسام المضادة وإعادة الاستخدام لأجسام مضادة ملتقطة لاحقاً. وبالرغم من أن هناك طرق مختبرة لتعرية أغشية النيتروسيليلوز، تظل أغشية الـPVDF أسهل تعرية، وتسهل استخدام أكثر قبل أن يقوم التشويش الخلفي بإعاقة التجارب. أحد الاختلافات الأخرى هو، بعكس النيتروسيليلوز، الـPVDF يجب أن ينقع في 95 إيثانول، بروبانول أو ميثانول قبل الاستخدام. أغشية الـPVDF أيضاً تكون أكثر سمكاً وأكثر مقاومة للضرر خلال الاستخدام.


    الفصل الكهربائي للهلام ببعدين


    2D-SDS-PAGE ثنائي الأبعاد يستعمل المبادئ والتقنيات المُشار إليها اعلاه. كما يشير الاسم، فإن هذه الطريقة تشمل هجرة سلسلة البروتينات في بعدين. في البُعد الأول تقوم السلسلة البروتينية بالأنفصال حسب نقطة التعادل الكهربي. أما في البعد الثاني تنفصل السلسلة البروتينية حسب وزنها الجزيئي. تُقاس نقطة التعادل الكهربي لبروتين مُعين بواسطة الرقم النسبي للأحماض الأمينية الموجبة (ك لايسين اللايسين ) والسالبة (ك جلوتاميت الجلوتاميت ), وتقوم الأحماض الأمينية السالبة بتزويد أعلى نقطة تعادل كهربي, ومن جهة أخرى تقوم الأحماض الامينية الموجبة بتزويد أقل نقطة تعادل كهربي.


    تسمح هذه الطريقة بفصل كل البروتينات الخلوية على هلام مفرد وكبير. من الفوائد المهمة لهذه الطريقة هي التمييز بين الأشكال المُختلفة لبروتين مُعين (مثلاَ البروتين الذي تمت فسفرتهُ، أي إضافة المجموعة السالبة الشُحنة). يُمكن قطع البروتين الذي تم فَصله من الهُلام وبعدها يتم تحليله بواسطة جهاز تحليل الكتلة mass spectrometry الذي يقوم باكتشاف البروتين وتحديد هويته.


    الاستخدامات في الفحص الطبي




    الطرق


  • طريقة مختبر الدكتور مارك بارتون فرانك


  • Western Blot.png تصغير لطخة ويسترن

    في تقانة حيوية التقنيات الحيوية ، لطخة ويسترن إنج Western Blot (تعرف أيضا باللطخة المناعية Immunoblot) هي طريقة اكتشاف بروتين معين في عينة أو مستخلص أنسجة، وهي من التقنيات الحيوية المخبرية. تستخدم الفصل الكهربائي للهلام لفصل البروتينات الطبيعية native proteins أو بروتين مفكك البروتينات المُتَمَسِّخة denatured proteins حسب طول السلاسل البروتينية (ظروف مفككة) أو حسب الشكل الثلاثي الأبعاد للبروتين (ظروف قومية/غير مفككة). يتم، في ما بعد، نقل البروتينات إلى غشاء (عادة ما يكون الغشاء مصنوعا من مادة نيتروسيليلوز النيتروسيليلوز أو PVDF )، حيث يتم التحقق (الاكتشاف) باستخدام أضداد مخصصة للبروتين الهدف. هناك الآن العديد من شركات المواد التي تتخصص في تجهيز أضداد (مستنسخة ومتعددة النسائل) ضد آلاف البروتينات المختلفة. وقد قام هذا بتقليل الوقت الذي تحتاجه لعمل لطخة بصورة كبيرة.



    كان يجب، سابقًا، تلقيح الحيوانات الكبيرة (مثل خروف الخرفان ، عنز العنز - يحتويان على الكثير من مصل المصل ) بالبروتين المستهدف مرتين (حيث أن الاستجابة المناعية الثانية تنتج أضدادا أكثر). ومن ثم إما يتم تصفية المصل واستخدامه (أضداد متعددة النسائل - Polyclonal -) أو يمكن فصل الخلايا البائية من الحيوان ودمجها خارج الجسم < >in vitro مع خلايا فأر سرطان سرطانية لتوليد خلايا هيبريدوما التي تستطيع في ما بعد إنتاج أضداد وحيدة النسيلة (Monoclonal).



    الأضداد التجارية عادة ما تكون مكلفة، ولكن يمكن إعادة استخدامها (استخدام ما يتبقى من الأجسام المضادة غير الملتصقة) بين التجارب. هذه الطريقة تستخدم في الأحياء الجزيئية ، الكيمياء الحيوية ، و علم الجينات المناعية Immunogenetics وعدة أخرى من علوم الأحياء الجزيئية.


    من التقنيات الأخرى المتعلقة هي استخدام الأجسام المضادة لاكتشاف البروتينات في الأنسجة أو الخلايا باستخدام صبغة مناعية الصبغة المناعية Immunostaining و إلايزا الإلايزا ELISA.


    تم صنع هذه الطريقة في مختبر جورج ستارك في جامعة ستانفورد عام 1981. قام وولتر نيل بورنيت بتسميتها باسم لطخة ويسترن ، Cite journal
    author W. Neal Burnette

    'Western blotting' electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate — polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A

    journal Anal Bioch


    year 1981

    month April

    volume 112

    issue 2

    pages 195-203



    PMID   6266278] [http //dx.doi.org/10.1016/0003-2697(81)90281-5 doi 10.1016/0003-2697(81)90281-5
    Citation's Classic Burnette



    وهو مشتق من اسم لطخة جنوبية اللطخة الجنوبية (Southern Blot لغة إنكليزية بالإنكليزية ، من Southern وهي نسبة إلى إدون ساذرن Edwin Southern، والتي تعني أيضا الجنوبي لغة إنكليزية بالإنكليزية . فسميت التقنية الجديدة بـويسترن، تلاعبا بالمعنى). و لطخة جنوبية اللطخة الجنوبية تقنية لاكتشاف حمن الحمض الريبي النووي منقوص الأكسجين DNA، قام إدون ساذرن Edwin Southern بصنعها عام 1975. تسمى طريقة اكتشاف حرن الحمض الريبي النووي RNA باسم لطخة شمالية اللطخة الشمالية .

     
    التعليقات (1 تعليق)

    (اضيف قبل 1 سنة)
    تبليغ عن اساءة

    انسخ الارقام تحتهم


    زائر     طلب حذف التعليق
    مفيد جداً
     


    اعلانات
    تصنيفات الموقع
    شاهد الجديد لهذه المواقع
    بئر السبع ميسوكسيمايد تل هشومير المرجة الزرقاء أسامة بن زيد الغاف دراسة جدوى خطة عمل روبرك الطاقة الداخلية مذكرات دورية نحو الشرق ايو جيما العياضي برباس العياضي شركة مكافحة حشرات خوارزمية ديكسترا مرفأ بيروت الكايد طاش ما طاش شركة كايد البسقلون كورونا سد حراض الفن البيزنطي عبد السلام بنعبد العالي رائد عودة مستشفى طيبة التخصصي غزوة خيبر شركة فواز لعامة للدراسات والمستندات كلوفيس الأول لمع قطع الغيار جميل خطاب ويلان نظم المعلومات المحاسبية محمود بن محمود البان باقادر مؤسسة بن شيهون الصحة الحقن المجهري الصين معلمات معلومات اتجاه البطولي أرضروم تنافسية شكاوي محمد الحاج سالم تكرلي مبرهنة عدم الاكتمال علاج عرق النسا موقع سنهدريم التكامل العددي كهربا الحكومة الحكومة التونسية مسالك بولية معاهدة فاليتا مستشفي بدر مشاغل مراكز التجميل محمد حافظ الشريدة وديع سعادة مشغل جرافيزم شكا الربان حديقة التجارة نقليات الهباس بن دعجم بطباط حمود بوعلام حميدة معركة ثابسوس براتا البن الاخضر مشروع تخرج الزكاه ديدفورت تاريخ فواصل الكتب توسعة المسجد النبوي نادي الفتح telnet 1978 عصبام اللوزتين سبيكمان 213 الاقتصاد رمادي عادي فندق العليا تشويه سمعه اسماك الأسماك مؤسسة
    أخبار السعودية اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار قطر اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار الإمارات اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار الكويت اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار السياحة اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار البحرين اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار المغرب اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار الاردن اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار فلسطين اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار عمان اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار لبنان اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار السودان اليوم الجمعة 20/07/2018 - أخبار الكورة اليوم الجمعة 20/07/2018 - اعلانات الحراج اليوم الجمعة 20/07/2018 - اسعار السيارات بالكويت الجمعة 20/07/2018 - اسعار العقارات بالكويت الجمعة 20/07/2018