اليوم: الاربعاء 26 سبتمبر 2018 , الساعة: 12:46 م / اسعار صرف العملات ليوم الاربعاء 26/09/2018

اعلانات

محرك البحث

تفاعل البوليميراز المتسلسل الخطوات

نشر قبل 2 سنة

156 مشاهدة

اضافة تعليق

إضافة صورة

هل هنالك خطأ بهذا المحتوى ؟

العنوان	البوليميراز المتسلسل الخطوات ">
المحتوى	<h1>ال<a href="cat-139599.html">خطوات</a></h1> <h2> ت<a href="cat-139608.html">حسين</a> التفاعل </h2> يتم في بداية <a href="cat-139342.html"><a href="cat-139516.html">الام</a>ر</a> ادخال شريط DNA المراد مسخه مع البادئ (primers) وكذلك ب<a href="cat-140039.html">وجود</a> انزيم DNA polymerase وال<a href="cat-140337.html">قواعد</a> النتروجينه في انوبة <a href="cat-141477.html">صغير</a>ه تسمى eppender tube وتمر ب<a href="cat-140897.html">ثلاث</a> <a href="cat-140338.html">مراحل</a> متتالية <br/> <ol> <li><a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> المسخ او التفكك وتحدث في <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141018.html">حرارة</a> بين 94-98 م حيث <a href="cat-140267.html">يبدأ</a> شريط DNA ب<a href="cat-139526.html">الان</a>قسام إلى خيطين منفصلين عن بعض وتحدث <a href="cat-139225.html">خلال</a> <a href="cat-139557.html">فترة</a> زمنية بين 1 - 9 دقائق</li> <li><a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> الالتصاق وفي هذه ال<a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> <a href="cat-140267.html">يبدأ</a> البادئ بالاتصاق على خيط DNA وتتم ب<a href="cat-140187.html">درجة</a> حراريه اقل من <a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> التفكك 50 - 65 ° س، وتتم تقريباً <a href="cat-139225.html">خلال</a> ظ¥ ثواني</li> <li><a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> التمدد او <a href="cat-140528.html">ال<a href="cat-140270.html">بناء</a></a> تعد هذه ال<a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> الاخيرة في عملية المسخ وتحدث في <a href="cat-140187.html">درجة</a> 75–80 °س، وهذه هي ال<a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-139503.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارية</a> <a href="cat-140619.html"><a href="cat-140091.html">المناسب</a>ة</a> <a href="cat-139371.html">لعمل</a> <a href="cat-139526.html">الان</a>زيم DNA polymerase لتقوم ب<a href="cat-140270.html">بناء</a> خيط <a href="cat-140500.html">الحامض</a> النووي ال<a href="cat-139413.html">جديد</a></li> </ol> هذه ال<a href="cat-140338.html">مراحل</a> ال<a href="cat-140897.html">ثلاث</a> تعتبر دوره واحد يصبح <a href="cat-140492.html">فيها</a> <a href="cat-140500.html">الحامض</a> قد تضاعف إلى نسختين ، ان اساس مبدأ عمل ال PCR هو ال<a href="cat-141496.html">اعتماد</a> على ال<a href="cat-139338.html">دورة</a> <a href="cat-139503.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارية</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> تستخدم <a href="cat-139885.html">الدين</a>اميكا <a href="cat-139503.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارية</a> من تفاعلات الحمض النووي عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> تناوب التسخين والتبريد لعينات ال PCR بعد تحديد درجات <a href="cat-141657.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارة</a> . وهذه ا<a href="cat-139371.html">لعمل</a>ية تمكن من فصل فرعي الحمض النووي الحلزوني المزدوج في <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141018.html">حرارة</a> عالية (DNA melting) وتحت درجات <a href="cat-141657.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارة</a> المنخفضة فان كل فرع من حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي يستخدم بواسطة انزيمات بلمرة الحمض النووي ل<a href="cat-141170.html">انتاج</a> <a href="cat-140228.html"><a href="cat-140202.html">تركي</a>ب</a> <a href="cat-139413.html">جديد</a> <a href="cat-140218.html">كامل</a> منه. كل <a href="cat-139338.html">دورة</a> من PCR تضم <a href="cat-140897.html">ثلاث</a> <a href="cat-140783.html">عمليات</a> <a href="cat-141047.html">مختلفة</a> في <a href="cat-139338.html">دورة</a> <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141657.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارة</a> (( t perature cycling اولا التمسخ (denaturation) او تذويب الحمض النووي حيث يفصل ال DNA الي قطعتين (ssDNA) من <a href="cat-139225.html">خلال</a> كسر ال<a href="cat-141365.html">رابطة</a> الهيدروجينية بين ا<a href="cat-140968.html">زواج</a> ال<a href="cat-140337.html">قواعد</a> . تعتبر هذه ال<a href="cat-139134.html">خطوة</a> قصيرة لانها تحتاج ما بين 10 <a href="cat-140748.html">ثانية</a> و 30 <a href="cat-140748.html">ثانية</a> في 92 <a href="cat-140187.html">درجة</a> مئوية إلى 96 <a href="cat-140187.html">درجة</a> مئوية . اما ال<a href="cat-139134.html">خطوة</a> <a href="cat-139418.html">الثاني</a>ة <a href="cat-140856.html">الصلب</a> ( annealing) يتم صلب ال DNA <a href="cat-142076.html">الاول</a>ي ل<a href="cat-141170.html">انتاج</a> سلاسل مكملة ل (ssDNA) من <a href="cat-139225.html">خلال</a> تشكيل <a href="cat-141365.html">رابطة</a> هيدروجينية روابط هيدروجينية بالتالي ينتج اثنين من dsDNA <a href="cat-139413.html">جديد</a> وهذه الاجزاء القصيرة تؤدي في نهايتها الي تشكيل الحمض النووي ال<a href="cat-139413.html">جديد</a> . اما ال<a href="cat-139134.html">خطوة</a> <a href="cat-139978.html">الثالث</a>ة الاستطالة (elongation) وتسمى ايضا التكرار <a href="cat-139526.html">الان</a>زيمي يتم <a href="cat-140492.html">فيها</a> <a href="cat-141316.html">اتحاد</a> ايونات م<a href="cat-140051.html">وجبة</a> كعامل محفز والكمية <a href="cat-139538.html"><a href="cat-141986.html">المطلوب</a>ة</a> من مكملة ال deoxynucleotides (dNTPs) . وانزيم بلمرة ال DNAيبدا بتكرار ال DNA في <a href="cat-140163.html">ال<a href="cat-139972.html">موقع</a></a> التمهيدي . وتستمر هذه ا<a href="cat-139371.html">لعمل</a>يات با<a href="cat-141054.html">عادة</a> تسخين ال dsDNA وفصله مرة اخرى .في كل <a href="cat-139338.html">دورة</a> PCR يزداد جزء الحمض النووي <a href="cat-139654.html">زيادة</a> أسية وفقا لاللأس 2 (يعني ان <a href="cat-139842.html">الواحد</a> يصبح اثنان والاثنان اربعة ثم ثمانية…) .بما ان هذه ا<a href="cat-139371.html">لعمل</a>ية تستخدم لتضخيم الحمض النووي فان من 35 الى 40 <a href="cat-139338.html">دورة</a> نحتاجها <a href="cat-141805.html">ل<a href="cat-140453.html">تقديم</a></a> ما يكفي من <a href="cat-141156.html">عينة</a> ال DNAللتحليل .<br/><br/> بحتاج بوليمر الحمض النووي الى محفز على شكل كيتون كيتونات ثنائية التكافؤ وهي اما مغنسيوم المغنيسيوم او منغنيز المنغنيز . تستخدم هذه المحفزات ايضا كعامل <a href="cat-140524.html">مساعد</a> في تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يمرات المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> . ال<a href="cat-140202.html">تركي</a>ز <a href="cat-139592.html">الطب</a>بيعي للمنغنيز هو 2.5 مايكرومتر . المشعلات هي أليغونيوكليوتايد (في PCR، وتستخدم أ<a href="cat-140968.html">زواج</a> التمهيدي) <a href="cat-139201.html">التي</a> تمت إضافتها على شكل قطع <a href="cat-139282.html">مصنع</a>ة <a href="cat-141477.html">صغير</a>ة من حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي و<a href="cat-139201.html">التي</a> تحتوي على متتاليات مكملة لل<a href="cat-139295.html">منطقة</a> المستهدفة لجزيء الحمض النووي المستهدف. المشعلات تصلب للجزء ال<a href="cat-140957.html">نهائي</a> من الت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> المستهدف ليتم تضخيمها. هذه المشعلات هي المكونات <a href="cat-139210.html">ال<a href="cat-139396.html">رئيس</a></a>ية للتضخيم <a href="cat-139526.html">الان</a>تقائي و المكرر لقطع الحمض النووي المستهدفة ضمن <a href="cat-139302.html">مجموعة</a> من الأحماض النووية, و هي <a href="cat-141054.html">عادة</a> ما ت<a href="cat-139823.html">تكون</a> من 20-25 من ال<a href="cat-140337.html">قواعد</a> الطويلة, و ما لا <a href="cat-139946.html">يزيد</a> عن 30 قاعدة طويلة. وتستخدم <a href="cat-139302.html">مجموعة</a> م<a href="cat-141156.html">عينة</a> من المشعلات لتضخيم ناتج واحد من تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>. <a href="cat-140488.html">واحدة</a> من المشعلات يصلب إلى حبلا في <a href="cat-139519.html">الأم</a>ام وال<a href="cat-140948.html">أخرى</a> إلى <a href="cat-140334.html">الحب</a>ل العكسي من جزيئات الحمض النووي <a href="cat-139225.html">خلال</a> <a href="cat-139134.html">خطوة</a> <a href="cat-140856.html">الصلب</a>. المشعلات انفسهم يتم <a href="cat-139960.html">تصنيع</a>هم و ت<a href="cat-140354.html">جميع</a>هم غالبا من Phosphoramidites نيوكليوزيد مفرد, ب<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> معين. هذه المشعلات بالتالي ترتبط بسهولة بالحمض النووي المكتمل و<a href="cat-139916.html">الخاص</a> بها, أو بجدائل الحمض النووي الريبي في ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> محدد, لتشكيل الدوبلكس, أو أقل في كثير من الأحيان, الهجينة لمرتبة أعلى. على هذا النحو، المشعلات لازمة لبدء <a href="cat-140228.html"><a href="cat-140202.html">تركي</a>ب</a> الحمض النووي, وبالتالي فانها تسمح لبوليميريز الحمض النووي ل<a href="cat-141276.html">تمديد</a> أليغنوكليوتيد و تكرار حبلا التكميلية. بوليمبريزالحمض النووي <a href="cat-140267.html">يبدأ</a> التكرار في 3'-<a href="cat-140938.html">نهاية</a> التمهيدي، ويكمل حبلا المعاكس. والتمهيدي( المشعل) مع <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141657.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارة</a> <a href="cat-140856.html">الصلب</a> أعلى بكثير من <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141018.html">حرارة</a> التفاعل <a href="cat-140856.html">الصلب</a> مع <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141657.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارة</a> <a href="cat-140856.html">الصلب</a> أعلى بكثير من <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141018.html">حرارة</a> التفاعل <a href="cat-140856.html">الصلب</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تفوت-hybridise وتمدد حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي في مكان غير <a href="cat-141936.html">صحيح</a> على طول ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الحمض النووي ، بينما عند <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141018.html">حرارة</a> أقل بكثير من <a href="cat-140187.html">درجة</a> <a href="cat-141018.html">حرارة</a> <a href="cat-140856.html">الصلب</a>، <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تفشل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي ليصلب وي<a href="cat-141583.html">توسع</a> على ال<a href="cat-141007.html">إطلاق</a>. تحتاج متواليات المشعل ( التمهيدي ) أيضا أن يتم <a href="cat-140308.html">اختيار</a>ه لتحديد فريد ل<a href="cat-139295.html">منطقة</a> من الحمض النووي، وتجنب إمكانية تفويت-تهجين لت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> مماثل قريب. وهكذا صممت هذه البادئات ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> أدوات محددة، مثل <a href="cat-139179.html">برنامج</a> التمهيدي اكسبرس (ال<a href="cat-140431.html">حياة</a> تكنولوجيز، كارلسباد، <a href="cat-141176.html">الولايات</a> <a href="cat-139421.html">المتحدة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ريكية)، أو غيرها. و<a href="cat-140564.html">هناك</a> <a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> شائعة ال<a href="cat-139561.html">استخدام</a> في <a href="cat-140762.html">تصميم</a> التمهيدي تنطوي على بحث <a href="cat-139526.html">الان</a>فجار, <a href="cat-139580.html">الذي</a> هو أداة بحث في قاعدة <a href="cat-139411.html">بيان</a>ات بنك الجينات , حيث وينظر إلى كل من <a href="cat-141094.html">المناطق</a> المحتملة <a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> للتمهيدي ( المشعل ) الربط بها. أيضا ينبغي تجنب تكرار في المشعلات, لأن تشكل حلقة قد يحدث, و <a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تسهم في تفويت التهجين.<br/> مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h1>المبادئ الكمية لتفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>ميرات المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a></h1> على مر <a href="cat-140348.html">السن</a>وات ال<a href="cat-142088.html">قليل</a>ة <a href="cat-141191.html">الماضي</a>ة ؛ تمت عملية <a href="cat-140505.html">تطوير</a> الادوات والاجهزة <a href="cat-139201.html">التي</a> ادت الى الى توسيع نطاق تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يمرات المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <a href="cat-139580.html">الذي</a> تمكن من <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن منتوجات ال(Q-PCR / QRT) و<a href="cat-139580.html">الذي</a> يعرف ايضا باسم (PCR (QPCR وهذا ال<a href="cat-140346.html">جهاز</a> <a href="cat-139580.html">الذي</a> يعتبر من <a href="cat-140278.html">اكثر</a> الاجهزه نفوذا في <a href="cat-139574.html">عالم</a> علم الأحياء الجزيئي البيولوجيا الجزئية . وبال<a href="cat-140129.html">نسبة</a> لهذه المتواليات المحددة <a href="cat-139291.html">داخل</a> حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي أو<a href="cat-139201.html">التي</a> تعمل ك<a href="cat-140134.html">قالب</a> [ <a href="cat-139492.html">يمكن</a> نسخها، أو تضخيم ، بما يصل الى عدة <a href="cat-140971.html">آلاف</a> من أمثالها او ما يصل الى <a href="cat-139786.html">مليون</a> من الاضعاف في التقليدية PCR،كما يستخدم PCR للكشف الكمي والنوعي لت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> تضخيمها للوقت الحقيقي وهوه (QPCR). كما ينطوي على تحليل PCR بعد ان يتم (الهلام الكهربائي وتحليل <a href="cat-140828.html">الصور</a> على النحو الوارد اعلاه) ففي هذه ا<a href="cat-139371.html">لعمل</a>ية يتم قياس كمية النتج من PCR في كل <a href="cat-139338.html">دورة</a>. وهذه القدرة على رصد رد الفعل <a href="cat-139225.html">خلال</a> مرحلته الاسية تمكن المستخدم من تحديد المبلغ <a href="cat-142076.html">الاول</a>ي للهدف بدقة <a href="cat-140668.html"><a href="cat-140324.html">كبير</a>ة</a> . كما ان الكمية <a href="cat-139492.html">يمكن</a> ان <a href="cat-139823.html">تكون</a> اما العدد <a href="cat-139447.html">المطلق</a> للنسخ او الكمية القريبة و<a href="cat-140587.html">عندما</a> تطبع لادخال الحمض النووي او الجينات تطبع تطبييع اضافي.<br/> المكونات الاساسية في قياس PCR، والاختلافات الوحيدة هي في كشف (مضان صبغ) <a href="cat-139580.html">الذي</a> يعمل على تضخيم <a href="cat-141838.html">الهدف</a>،وشرط لمنصة <a href="cat-140593.html">أجهزة</a> م<a href="cat-141156.html">عينة</a>. ت<a href="cat-139823.html">تكون</a> <a href="cat-140593.html">أجهزة</a> QPCR من دائري حراري، <a href="cat-140346.html">جهاز</a> كم<a href="cat-140417.html">بيوت</a>ر، و<a href="cat-141534.html"><a href="cat-140670.html">البصر</a>ي</a>ات لمضان<br/> الإثارة وجمع <a href="cat-139526.html">الان</a>بعاثات (أ مقياس التألق)، و<a href="cat-139752.html">الحصول</a> على ال<a href="cat-139411.html">بيان</a>ات وتحليل <a href="cat-140167.html">البر</a>مجيات. و<a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن <a href="cat-141838.html">الهدف</a> المتضخم ب<a href="cat-139197.html">طريق</a>تين مختلفتين <a href="cat-139483.html">الأول</a>ى، مع دون تحديد الأصباغ الفلورية أن يقحم مع أي dsDNA. و<a href="cat-139418.html">الثاني</a>ة، مع ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> محدد تحقيقات حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي <a href="cat-139201.html">التي</a> ت<a href="cat-139823.html">تكون</a> من أليغنوكليوتيد] <a href="cat-139201.html">التي</a> وصفت مع صبغة الفلور الصبغة <a href="cat-139201.html">التي</a> تسمح ب<a href="cat-140396.html">ظهور</a> الشكل، وبالتالي يتم <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عنه، إلا أن الحمض النووي <a href="cat-139580.html">الذي</a> يحتوي هدف الت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>. مع <a href="cat-139561.html">استخدام</a> فلوري غير محدد الأصباغ <a href="cat-139654.html">زيادة</a> في QPCR المنتج <a href="cat-139225.html">خلال</a> QPCR <a href="cat-139704.html">يؤدي</a> إلى <a href="cat-139654.html">زيادة</a> في كثافة مضان <a href="cat-139201.html">التي</a> تقاس في كل <a href="cat-139338.html">دورة</a>، مما يسمح لتراكيز dsDNA ل<a href="cat-139947.html">يكون</a> كميا. ومع ذلك، إذا كان تحديد من QPCR م<a href="cat-139348.html">حدود</a>ة حيث أن هذه الأصباغ وربط كل من dsDNA <a href="cat-140295.html">المنتجة</a> <a href="cat-139291.html">داخل</a> وQPCR. والأصباغ الفلورية وبالتالي غير محددة تقيس ليس فقط QPCR <a href="cat-141986.html">المطلوب</a> ال<a href="cat-141409.html">منتجات</a>، ولكن أيضا <a href="cat-141409.html">منتجات</a> PCR غير محددة (بما في ذلك dimers التمهيدي على سبيل المثال).<br/> هذا <a href="cat-139492.html">يمكن</a> ان <a href="cat-139704.html">يؤدي</a> الى ت<a href="cat-139291.html">داخل</a> ، أو منع التقدير الدقيق للهدف <a href="cat-141540.html">المقصود</a> (ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>). و<a href="cat-141440.html">الكشف</a> ال<a href="cat-139334.html">أكثر</a> تحديدا الممكن هوه <a href="cat-139561.html">استخدام</a> <a href="cat-141161.html">اختبار</a> حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي DNAذا ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> معين، و<a href="cat-139580.html">الذي</a> فقط <a href="cat-141890.html">يكشف</a> عن ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الحمض النووي <a href="cat-141838.html">الهدف</a>. <a href="cat-139561.html">استخدام</a> هذه التحقيقات <a href="cat-139704.html">يؤدي</a> الى <a href="cat-139654.html">زيادة</a> <a href="cat-140668.html"><a href="cat-140324.html">كبير</a>ة</a> في خصوصية <a href="cat-141440.html">الكشف</a> و<a href="cat-140577.html">حساسية</a> ال<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a>، وكما يسمح هذا الكم حتى في <a href="cat-140039.html">وجود</a> تضخيم الحمض النووي غير محدد.<br/> ال<a href="cat-139302.html">مجموعة</a> ال<a href="cat-141661.html">متنوعة</a> من التحقيقات ال<a href="cat-141047.html">مختلفة</a> تستخدم الآن (جزيئية المنارة، عقرب التحقيق، وغيرها)، على الرغم من أن تلك هي <a href="cat-139615.html">الطرق</a> ال<a href="cat-139334.html">أكثر</a> شيوعا <a href="cat-141638.html">المستخدمة</a> الا انه يوجد ايضا التحقيقات المائية (تحقيقات TAQMAN) وهوه المسمى مسبار المائي مع مراسل فلوري في <a href="cat-140938.html">نهاية</a> 5' ومع جزيء يعرف باسم 'فاكهه تقضي في دورته الطرف المقابل. عند التحقيق ال<a href="cat-141465.html">سليم</a>، وعلى مقربة من مراسل و فاكهه تقضي <a href="cat-141322.html">يمنع</a> <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن مضان المراسل. هذا التبريد لمراسل مضان من قبل فاكهه تقضي يحدث من <a href="cat-139225.html">خلال</a> عملية الرنين مضان لنقل <a href="cat-140634.html">الطاقة</a>. كما ان حصيلة تفاعل PCR، <a href="cat-139225.html">خلال</a> ال<a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> <a href="cat-140856.html">الصلب</a>ة، الاشعال والتحقيق في التهجين إلى شريطا ssDNA مكملة ومراسل المضان يبقى مطفأ. بدء التالية من بلمرة الحمض النووي ال<a href="cat-139413.html">جديد</a> شريطان من الاشعال، بوليميريز <a href="cat-140500.html">الحامض</a> النووي ثم يصل التحقيق لهاعند 5'-3'-<br/> ال<a href="cat-140972.html">نشاط</a> <a href="cat-139526.html">الان</a>وية <a href="cat-140643.html">ال<a href="cat-140318.html">خارج</a></a>ية يحط التحقيق.<br/> وبعد انبعاث المصدرالمنفصل <a href="cat-139492.html">يمكن</a> بعد ذلك ان يتم <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن المراسل الفلوري بعد الإثارة مع المصدر <a href="cat-140091.html">المناسب</a> لضوء، مما <a href="cat-139704.html">يؤدي</a> إلى <a href="cat-139654.html">زيادة</a> في مضان. وتجدر الإشارة الى ان التحقيقات <a href="cat-141047.html">مختلفة</a> في التسميات بسبب ان مضان الصبغة <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139561.html">استخدام</a>ها في فحوصات متعددة للكشف عن العديد من الأحماض النووية في رد فعل QPCR واحد.<br/> لفهم <a href="cat-139303.html">فوائد</a> QPCR، <a href="cat-140141.html">لمحة</a> <a href="cat-140114.html">عامة</a> عن أساسيات PCR الضرورية.<br/> في بداية رد فعل PCR، الكواشف هي الإفراط في ال<a href="cat-140134.html">قالب</a> وتراكيز الكافية <a href="cat-141801.html">لل<a href="cat-141409.html">منتجات</a></a> هي في أدنى مستوى ولاست<a href="cat-141054.html">عادة</a> <a href="cat-139209.html"><a href="cat-139592.html">الطب</a>ي</a>عة للمنتج فلا يجب التنافس مع التمهيدي <a href="cat-139233.html">الملز</a>م، وعائدات التضخيم في الثابت الأسي ومعدل.<br/> ال<a href="cat-141456.html">نقطة</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> معدل التفاعل ي<a href="cat-141318.html">توقف</a> عن أن <a href="cat-139947.html">يكون</a> الأسي ويدخل <a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> خطية من التضخيم هي المتغير <a href="cat-139465.html">العالي</a>، حتى بين <a href="cat-139568.html">العين</a>ات تتكرر. ثم، في <a href="cat-139338.html">دورة</a> لاحقة، والتضخيم يتم كقطرات معدل الصفر القريب (تصل إلى القمة)، و<a href="cat-139334.html">أكثر</a> من ذلك ب<a href="cat-142088.html">قليل</a> المنتج PCR. لتصل للدقة المتناهية، فإنه من الضروري جمع ال<a href="cat-139411.html">بيان</a>ات الكمية في ال<a href="cat-141456.html">نقطة</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> كل <a href="cat-141156.html">عينة</a> في <a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> الأسي من التضخيم. وتحليل ردود الأ<a href="cat-141145.html">فعال</a> <a href="cat-139225.html">خلال</a> ال<a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> الأسية في عدد <a href="cat-141941.html">الدور</a>ات الم<a href="cat-141156.html">عينة</a> ينبغي أن توفر نظريا عدة أوامر من حجم النطاق <a href="cat-139885.html">الدين</a>اميكي، و<a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139823.html">تكون</a> <a href="cat-141054.html">عادة</a> 5-9 أوامر من <a href="cat-139564.html">الحج</a>م الكمي. مضان من ال<a href="cat-141409.html">منتجات</a> PCR لكل <a href="cat-141156.html">عينة</a> في كل <a href="cat-139338.html">دورة</a> يتم <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عنه ويقاس في <a href="cat-140346.html">جهاز</a> QPCR، و<a href="cat-139654.html">زيادة</a> للهندسية لها أن يتوافق معه.<br/> يتم <a href="cat-139561.html">استخدام</a> ال<a href="cat-139654.html">زيادة</a> الهائلة للمنتج لتحديد <a href="cat-139338.html">دورة</a> العتبة في كل رد فعل. ويعتبر هذا مضان <a href="cat-139201.html">التي</a> تم جمعها عن رد فعل إيجابي QPCR في الواقع بمثابة عملية التضخيم السيني، حيث يتم رسم مضان في عدد من <a href="cat-141941.html">الدور</a>ات.وأجزاء <a href="cat-141047.html">مختلفة</a> من منحنيات التضخيم <a href="cat-140172.html">مهمة</a>. يمثل الأساس ليتم طرح مستوى الضوضاء في <a href="cat-141941.html">الدور</a>ات <a href="cat-142076.html">الاول</a>ى، وهذا من مضان <a href="cat-139752.html">الحصول</a> <a href="cat-140398.html"><a href="cat-139832.html">عليه</a>ا</a> من <a href="cat-141409.html">منتجات</a> PCR. العتبة هو المستوى <a href="cat-139580.html">الذي</a> يتم <a href="cat-140154.html">تعديل</a>ه ل<a href="cat-141350.html">قيمة</a> أعلى من خط الأساس <a href="cat-139580.html">الذي</a> يجب أن <a href="cat-139947.html">يكون</a> م<a href="cat-140039.html">وجود</a>ا في ال<a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> الأسية من عملية التضخيم، و<a href="cat-139338.html">دورة</a> عتبة (CT) هو ال<a href="cat-139338.html">دورة</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> مؤامرة التضخيم يعبر عتبة . منحنى قياسي <a href="cat-139492.html">يمكن</a> استخلاصها من الت<a href="cat-142067.html">خفيف</a>ات لت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> من <a href="cat-141156.html">عينة</a> إيجابية. <br/> <a href="cat-140564.html">هناك</a> العديد من التطبيقات لQPCR. وهي تستخدم <a href="cat-141054.html">عادة</a> لكلا <a href="cat-141780.html">الأساسية</a> و<a href="cat-139679.html">البحث</a> و ال<a href="cat-139776.html">تشخيص</a>. يستخدم ال<a href="cat-139776.html">تشخيص</a> QPCR للكشف عن <a href="cat-142083.html">سرعة</a> الأحماض النووية <a href="cat-139201.html">التي</a> تستخدم في ال<a href="cat-139776.html">تشخيص</a>، على سبيل المثال، ال<a href="cat-139358.html">أمراض</a> المعدية، و<a href="cat-139358.html">أمراض</a> ال<a href="cat-139497.html">سرطان</a> او تشوهات وراثية.<br/> مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h1>تثبيط تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a></h1> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> تحديد <a href="cat-139561.html">استخدام</a> النسخ العكسي لتفاعل البلمرةالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> التقليدي ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> مثبطات التفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>. هذا هو الحال <a href="cat-139904.html">بشكل</a> خاص <a href="cat-140587.html">عندما</a> يتم تطبيق تقنيات مباشرة لعينات بيولوجية معقدة للكشف عن الكائنات الحية الدقيقة، مثل السريرية والبيئية وعينات ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> <a href="cat-139234.html">ال<a href="cat-140637.html">غذائي</a>ة</a> .مثبطات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تنشأ من <a href="cat-139568.html">العين</a>ة نفسها أو ك<a href="cat-141487.html">نتيجة</a> لل<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> استخدمت لجمع أو <a href="cat-139128.html">تحضير</a> <a href="cat-139568.html">العين</a>ة . وفي كلتا الح<a href="cat-139201.html">التي</a>ن، <a href="cat-139492.html">يمكن</a> للمثبطات الحد <a href="cat-139904.html">بشكل</a> <a href="cat-140324.html">كبير</a> من ال<a href="cat-140577.html">حساسية</a> وتوسيع كفاءة تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>. تثبيط النسخ العكسي لتفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> يعرض استفسارات إضافية ، بما ان اختلافات طفيفة في <a href="cat-141145.html">فعال</a>ية التضخيم بين <a href="cat-139568.html">العين</a>ات <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن <a href="cat-139989.html">تؤثر</a> <a href="cat-139904.html">بشكل</a> <a href="cat-140324.html">كبير</a> على دقة تقدير <a href="cat-140134.html">قالب</a> النسخ .<br/> <a href="cat-139541.html">أنواع</a> مثبطات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> عينات ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> <a href="cat-139234.html">ال<a href="cat-140637.html">غذائي</a>ة</a> تنتج بعض ال<a href="cat-139624.html">مشاكل</a> <a href="cat-139210.html">ال<a href="cat-139396.html">رئيس</a></a>ية المرتبطة ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> فحوصات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> نظراً لمختلف مثبطاته <a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> العثور <a href="cat-140398.html"><a href="cat-139832.html">عليه</a>ا</a> في هذه <a href="cat-139568.html">العين</a>ات. من ناحية <a href="cat-140948.html">أخرى</a> ، فإنه لا بد من توفير <a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> لديها بروتوكول مرن <a href="cat-139492.html">يمكن</a> تطبيقه على العديد من <a href="cat-139541.html">أنواع</a> الأنسجة الغشائية <a href="cat-141003.html">ل<a href="cat-140458.html">إزالة</a></a> هذه ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> المثبطة بفاعلية و<a href="cat-139201.html">التي</a> تت<a href="cat-139291.html">داخل</a> مع توسيع تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> . و<a href="cat-139492.html">يمكن</a> لمثبطات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> أن تنشأ من <a href="cat-139568.html">العين</a>ة الأصلية أو من <a href="cat-139128.html">تحضير</a> <a href="cat-139568.html">العين</a>ة مسبقاً قبل تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> . <a href="cat-139492.html">يمكن</a> تثبيط تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> تحديد <a href="cat-141145.html">فعال</a>ية إنزيم بلمرة الحمض النووي( الثابت ب<a href="cat-141657.html"><a href="cat-141460.html">الحر</a>ارة</a>)،و تحطيم أو <a href="cat-141765.html">القبض</a> على حمض نووي الأحماض النووية ، و <a href="cat-139373.html">ال<a href="cat-141135.html">تدخل</a></a> في تحلل ال<a href="cat-141417.html">خلايا</a>.<br/> ال<a href="cat-140483.html">نتائج</a> <a href="cat-140599.html">السل</a>بية <a href="cat-141470.html">الخاطئة</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أيضا أن تحدث بسبب تحلل ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي المستهدف في <a href="cat-139568.html">العين</a>ة. <a href="cat-139492.html">يمكن</a> لل<a href="cat-139450.html">مشكلة</a> أن <a href="cat-139952.html">تزيد</a> مع عزل البكتيريا أو الحمض النووي البكتيري مباشرةً من الأنسجة الغشائية <a href="cat-139522.html">لل<a href="cat-141157.html">مواد</a></a> <a href="cat-139234.html">ال<a href="cat-140637.html">غذائي</a>ة</a> ،مع عدم <a href="cat-140039.html">وجود</a> بروتوكول ل<a href="cat-139128.html">تحضير</a> <a href="cat-141156.html">عينة</a> <a href="cat-140488.html">واحدة</a> عرف با<a href="cat-139371.html">لعمل</a> من أجل كل تطبيق . <a href="cat-140587.html">عندما</a> <a href="cat-139947.html">يكون</a> <a href="cat-141838.html">الهدف</a> من تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> هو الكائنات الحية الدقيقة، <a href="cat-140564.html">هناك</a> <a href="cat-139134.html">خطوة</a> تخصيب <a href="cat-139492.html">يمكن</a> تضمينها إذا <a href="cat-141998.html">كانت</a> الكائنات الدقيقة م<a href="cat-140039.html">وجود</a>ة بأعداد <a href="cat-142088.html">قليل</a>ة جدا، على الرغم من أن معظم مرق التخصيب وأوساط الآغار <a href="cat-139526.html">الان</a>تقائية تحتوي على <a href="cat-141157.html">مواد</a> تثبط تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>. ال<a href="cat-139134.html">خطوة</a> ال<a href="cat-140172.html">مهمة</a> هي غسل ال<a href="cat-141417.html">خلايا</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> تم جمعها من التخصيب أو وسط الآغار بواسطة تكويرهم ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> طرد <a href="cat-139157.html">مركز</a>ي الطرد <a href="cat-139595.html">ال<a href="cat-139157.html">مركز</a></a>ي ، و<a href="cat-140458.html">إزالة</a> الطافي <a href="cat-139980.html">منها</a> ، و<a href="cat-140629.html">إ<a href="cat-141054.html">عادة</a></a> تعليق ال<a href="cat-141417.html">خلايا</a> في <a href="cat-139736.html">ال<a href="cat-141435.html">مياه</a></a> المالحة أو <a href="cat-139736.html">ال<a href="cat-141435.html">مياه</a></a> لاستخراج حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي . تطبيق بروتوكول إعداد جيد لل<a href="cat-141156.html">عينة</a> سوف يركز على ت<a href="cat-140354.html">جميع</a> البكتيريا، <a href="cat-140458.html">إزالة</a> المثبطات الكامنة في ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> <a href="cat-139234.html">ال<a href="cat-140637.html">غذائي</a>ة</a> و أوساط التنبيت، و <a href="cat-140202.html">تركي</a>ز الحمض النووي المستخرج . من المهم ذكر أنه تم العثور على مثبطات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> في <a href="cat-140354.html">جميع</a> <a href="cat-139541.html">أنواع</a> ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> <a href="cat-139234.html">ال<a href="cat-140637.html">غذائي</a>ة</a>، بما في ذلك ال<a href="cat-139854.html">لحوم</a> و<a href="cat-139598.html">ال<a href="cat-139649.html">حليب</a></a> والأجبان والتوابل.<br/> وتشمل هذه ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> كلوريد الصوديوم NaCl، كلوريد البوتاسيوم KCl، منظفات أيونية مثل deoxycholate الصوديوم، sarkosyl، كبريتات الصوديوم دوديسيل، و إيثانول الإيثانول ، <a href="cat-139760.html">الأيزو</a>بروبانول، الفينول، زيلين، cyanol، وبرموفينول الأزرق. <a href="cat-140587.html">عندما</a> يشتبه بتثبيط تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>، أبسط مسار ل<a href="cat-139371.html">لعمل</a> هو تمييع ال<a href="cat-140134.html">قالب</a> (وبالتالي أيضا أي مثبطات)، والاستفادة من <a href="cat-140577.html">حساسية</a> تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> PCR. <br/> التثبيط هو <a href="cat-139450.html">مشكلة</a> في العديد من تطبيقات تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> PCR، لا سيما تلك <a href="cat-139201.html">التي</a> تحتوي على <a href="cat-140452.html">كميات</a> <a href="cat-142088.html">قليل</a>ة من <a href="cat-140134.html">قالب</a> الحمض النووي أو <a href="cat-140134.html">قالب</a> حمض نووي محطم، <a href="cat-140587.html">عندما</a> <a href="cat-139947.html">يكون</a> ببساطة تمييع الاستخراج غير مرغوب به.<br/> في مستوى تجارب PCR المعيارية، ال<a href="cat-140483.html">نتائج</a> <a href="cat-140599.html">السل</a>بية أو عوائد <a href="cat-141409.html">منتجات</a> منخفضة <a href="cat-139904.html">بشكل</a> غير متوقع <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن <a href="cat-139947.html">يكون</a>ا <a href="cat-140521.html">مؤشر</a>ا على التثبيط، شريطة أن ال<a href="cat-140134.html">قالب</a> يجب أن <a href="cat-139947.html">يكون</a> معروف أنه م<a href="cat-140039.html">وجود</a>. بدلا من ذلك، كمية معروفة من حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي غير <a href="cat-142096.html">الذات</a>ية <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تضاف إلى <a href="cat-141156.html">عينة</a> وتضخم كسيطرة إيجابية <a href="cat-139291.html">داخل</a>ية. <br/> هذه ال<a href="cat-141840.html">ضوابط</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139561.html">استخدام</a>ها في تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الكمي QPCR، مزودة تقييمات كمية لأدائها. واستنادا إلى عرض نماذج التفاعلات <a href="cat-141460.html">الحر</a>كية الفردية، وظأو <a href="cat-141245.html">حساب</a> كفاءة التضخيم، QPCR يسمح بال<a href="cat-139824.html">تعرف</a> على للعينات المثبطة دون <a href="cat-140506.html">الحاج</a>ة إلى توسيع <a href="cat-139291.html">داخل</a>ي إضافي متحكم به<br/> <a href="cat-139561.html">استخدام</a> انزيم بلمرة DNA، <a href="cat-139580.html">الذي</a> هو أقل <a href="cat-141353.html">عرضة</a> للآثار من ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> المثبطة، هو حل ممكن لبعض <a href="cat-139624.html">مشاكل</a> تفاعل البلوليميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> PCR. على سبيل المثال، فإن عددا من انزيمات بلمرة ال DNA الأحدث ، مثل Tfl وrTth، هم <a href="cat-139334.html">أكثر</a> موثوقية من <a href="cat-139526.html">الان</a>زيم المبلمر Taq عند <a href="cat-139561.html">استخدام</a> <a href="cat-141231.html">قوالب</a> PCR مصنوعة من عينات لحمة أو جبنة. بال<a href="cat-139333.html">إضافة</a> إلى ذلك، إن <a href="cat-140972.html">نشاط</a> انزيم بلمرة DNA في <a href="cat-139576.html">حالة</a> <a href="cat-140039.html">وجود</a> مثبطات <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن يتم ت<a href="cat-139608.html">حسين</a>ه ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> بعض الميسرات كالمصل <a href="cat-140135.html">البقر</a>ي ألبومين albumin، ثنائي ميثيل سلفوكسيد dimethyl sulfoxide، توين 20، تريتون-X وال<a href="cat-140640.html">بيتي</a>ن betaine.<br/> العديد من المثبطات الكامنة لتفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> لم يتم ال<a href="cat-139824.html">تعرف</a> <a href="cat-140398.html"><a href="cat-139832.html">عليه</a>ا</a> على الرغم من أن بعضها معروف. على سبيل المثال <a href="cat-139598.html">ال<a href="cat-139649.html">حليب</a></a> يحتوي على مستوى عالٍ من الأيونات الم<a href="cat-140051.html">وجبة</a> (2+Ca)، الأنزيمات الهاضمة للبروتين ، والإنزيمات الهاضمة للحموض النووية ،الأحماض <a href="cat-140665.html">الدهنية</a> و الحمض النووي. وقد أظهرت <a href="cat-141820.html">الدراسات</a> أن مستويات عالية من الزيت و ملح <a href="cat-139587.html">ال<a href="cat-140973.html">طعام</a></a> <a href="cat-140422.html">الملح</a> ، و سكريات الكربوهيدرات، و حمض <a href="cat-140147.html">أمين</a>ي الأحماض <a href="cat-139519.html">الأم</a>ينية ليس لها أي آثار مثبطة؛ بينما الكاسيين هيدرو<a href="cat-142045.html">ليست</a>ات(ال<a href="cat-140730.html">مادة</a> الناتجة من تحلل بروتين الكاسيين الم<a href="cat-140039.html">وجود</a> في <a href="cat-139598.html">ال<a href="cat-139649.html">حليب</a></a>) ،Ca+2 ،و مكونات م<a href="cat-141156.html">عينة</a> من المرق <a href="cat-140132.html">المخ</a>صبة هي المثبطة لتفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> . بال<a href="cat-139333.html">إضافة</a> الى، الهيم، أملاح <a href="cat-141705.html">الصفراء</a>، والأحماض <a href="cat-140665.html">الدهنية</a>، والأجسام المضادة، والكولاجين ومثبطات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> العثور <a href="cat-140398.html"><a href="cat-139832.html">عليه</a>ا</a> في عينات ال<a href="cat-139854.html">لحوم</a> و كبد <a href="cat-139925.html">الكبد</a> . هذه المثبطات تمتلك <a href="cat-140113.html">تأثير</a>ات متفاوتة على تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>، وإن <a href="cat-141998.html">كانت</a> <a href="cat-139904.html">بشكل</a> عام س<a href="cat-140230.html">تجعل</a> <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن الأعداد ال<a href="cat-142088.html">قليل</a>ة من بكتيريا البكتيريا أو <a href="cat-140880.html">فيروس</a> ال<a href="cat-140880.html">فيروس</a>ات <a href="cat-139334.html">أكثر</a> صعوبةً. مصدر مهم آخر من مثبطات تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> هو ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> والكواشف <a href="cat-139201.html">التي</a> تتلامس مع <a href="cat-139568.html">العين</a>ات <a href="cat-139311.html">أثناء</a> معالجتها أو تنقية حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي . مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h1><a href="cat-141882.html">أساليب</a> <a href="cat-139415.html">كتاب</a>ة تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يمراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> PCR</h1> توصيف الجراثيم يعزل أدناه ال<a href="cat-139541.html">أنواع</a>، مستوى ال<a href="cat-139541.html">أنواع</a> <a href="cat-141660.html">يقوم</a> بتحديد <a href="cat-140599.html">السل</a>الات. <a href="cat-141882.html">أساليب</a> ال<a href="cat-139415.html">كتاب</a>ة <a href="cat-139201.html">التي</a> تصف الاختلافات بين ال<a href="cat-139541.html">أنواع</a> للكائن الحي <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن <a href="cat-139823.html">تكون</a> <a href="cat-139449.html">هامة</a> ل<a href="cat-139267.html">أسباب</a> <a href="cat-141907.html">عديدة</a> <a href="cat-139679.html">البحث</a> عن أصل تفشي ال<a href="cat-139358.html">أمراض</a> المعدية (مثلا <a href="cat-139587.html">ال<a href="cat-140973.html">طعام</a></a> الملوث)؛ وهي تقوم بتربط <a href="cat-141019.html">ال<a href="cat-139681.html">حالات</a></a> فردية بالتفشي، <a href="cat-139305.html">دراسة</a> الاختلافات في الإمراضية، مقدار حدة <a href="cat-140880.html">فيروس</a> ال<a href="cat-140880.html">فيروس</a> والمقاومة ب<a href="cat-139615.html">الطرق</a> البيولوجية. كل هذا للبحث عن طرق لتعقب لتلوث <a href="cat-140006.html">الأغذية</a> أو تتنع مصدر ميكروب الميكروبات ، و<a href="cat-140308.html">اختيار</a> بيئة بدائية <a href="cat-140269.html">لزرع</a> الميكروبات وفحصها.<br/> على مدى <a href="cat-140348.html">السن</a>وات ال 25 <a href="cat-141191.html">الماضي</a>ة، <a href="cat-140177.html">تطور</a> تقنيات جزيئية <a href="cat-141047.html">مختلفة</a> ل<a href="cat-139305.html">دراسة</a> مجموع مورثي جينوم الميكروبيات أدى إلى <a href="cat-139654.html">زيادة</a> <a href="cat-140668.html"><a href="cat-140324.html">كبير</a>ة</a> في طرق <a href="cat-139415.html">كتاب</a>ة ميكروب الميكروبات . ال<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ثل لل<a href="cat-139415.html">كتاب</a>ة هي ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الحمض النووي DNA sequence، <a href="cat-139201.html">التي</a> تسمح بالت<a href="cat-140755.html">فريق</a> الدقيق بين <a href="cat-140599.html">السل</a>الات. إن هذه ال<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> مكلفة نسبيا، و<a href="cat-140564.html">هناك</a> الكثير من <a href="cat-141882.html">أساليب</a> ال<a href="cat-139415.html">كتاب</a>ة <a href="cat-140139.html">المعتمدة</a> على حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي يتم <a href="cat-139561.html">استخدام</a>ها، وبعضها <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139561.html">استخدام</a>ها مع تحليل PCR.<br/> مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h1>نمط التضخيم </h1> عبر أي صنف من أصناف ميكروب الميكروبات ، الجينات ال<a href="cat-141047.html">مختلفة</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن <a href="cat-139823.html">تكون</a> متغيرة <a href="cat-139904.html">بشكل</a> خاص، وبالتالي فإنها <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تستخدم لتحديد <a href="cat-140599.html">السل</a>الة ضمن أصناف ميكروب الميكروبات .<br/> تفاعل البلوليميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> متعدد الإرسال mPCR <a href="cat-139892.html">يقدم</a> <a href="cat-140488.html">واحدة</a> من الاحتمالات لفحص الجينات <a href="cat-141047.html">مختلفة</a>. يوفر mPCR إمكانية تحليل متزامن للجينات ال<a href="cat-141047.html">مختلفة</a>. هذه الجينات <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن ترتبط بخبث الميكروب، و<a href="cat-141643.html">السمو</a>م، ومقاومته لمضادات الميكروبات، أو غيرها من الصفات للسلالات ال<a href="cat-141047.html">مختلفة</a>. <a href="cat-140039.html">وجود</a> أو <a href="cat-142081.html">غياب</a> <a href="cat-140653.html">عوامل</a> وراثية <a href="cat-141047.html">مختلفة</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-141440.html">الكشف</a> <a href="cat-139156.html">عنها</a> عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> mPCR، و<a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a>ها بعد ذلك <a href="cat-140453.html">تقديم</a> التمايز للسلالات. تحليلmPCR amplicons <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تأديتها مع <a href="cat-140730.html">مادة</a> هلامية كهربائية أو مباشرة عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الكمي qPCR.<br/> قام اكيبا وآخرون عام بتطبيق mPCR من أجل ال<a href="cat-139824.html">تعرف</a> على <a href="cat-140599.html">السل</a>الات <a href="cat-139210.html">ال<a href="cat-139396.html">رئيس</a></a>ية السبعة لل ال<a href="cat-139236.html">سالم</a>ونيلا (<a href="cat-139201.html">التي</a>فية الفأرية، كوليرا، <a href="cat-139171.html">الطفل</a>ية، الهدار، الملهبة، دبلن <a href="cat-139646.html">وال<a href="cat-139183.html">دجاج</a></a>ي). <a href="cat-141872.html">لهذا</a> mPCR، قاموا بشمل أحماض نووية من جين البداية invA لل<a href="cat-139236.html">سالم</a>ونيلا مع جين جينات البداية <a href="cat-140132.html">المخ</a>تصة ب serovar. ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> جينات البداية <a href="cat-139201.html">التي</a> تستهدف جينات الخبث الستة (fliC, stx1, stx2, eae, rfbE, hlyA) في mPCR، هذا سمح بتمايز سلالات E. coli O157 H7 من الأنماط المصلية O25، O26، O55، O78، O103، O111، O127 وO145. كما تم الت<a href="cat-140755.html">فريق</a> بين سلالات يرسينيا <a href="cat-139994.html">القولون</a> ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> mPCR، وفقا ل<a href="cat-140039.html">وجود</a> أو عدم <a href="cat-140039.html">وجود</a> جين الجينات <a href="cat-139201.html">التي</a> تشفر الخصائص المرتبطة الفوعة (الخبث)، من <a href="cat-139225.html">خلال</a> استهداف جينات ystA، ail، myfA، و virF.<br/> لقد تم <a href="cat-140505.html">تطوير</a> تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> متعدد الإرسال mPCR في <a href="cat-139305.html">دراسة</a> أجراها Kérouanton وزملائه ك<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> بديلة و<a href="cat-140964.html"><a href="cat-140386.html">سريع</a>ة</a> لمصل لستيريا مولدة للوحيدات ال<a href="cat-142045.html">ليست</a>يريا Listeria monocytogenes serotyping. قام ساكاي وآخرون عام ب<a href="cat-139415.html">كتاب</a>ة سلالات المكورات العنقودية <a href="cat-141497.html"><a href="cat-141307.html">الذهب</a>ية</a> (Staphylococcus aureus) بواسطة ال<a href="cat-139583.html">نظام</a> <a href="cat-139580.html">الذي</a> استخدم <a href="cat-140897.html">ثلاث</a>ة mPCRs على أساس ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> نوكليوتيد النوكليوتيدات للجينات <a href="cat-140132.html">المخ</a>ثرة. هذا ال<a href="cat-139583.html">نظام</a> سمح بالتمييز بين ثمانية <a href="cat-139541.html">أنواع</a> <a href="cat-139396.html">رئيس</a>ية للبكتيريا العنقودية <a href="cat-140132.html">المخ</a>ثرة staphylocoagulase (<a href="cat-139541.html">أنواع</a> (l-Vlll، و<a href="cat-140897.html">ثلاث</a>ة <a href="cat-139541.html">أنواع</a> فرعية (VIa–VIc)، وهذا يمثل <a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> <a href="cat-140964.html"><a href="cat-140386.html">سريع</a>ة</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139561.html">استخدام</a>ها كأداة <a href="cat-141607.html">الوبائي</a>ة لعدوى بكتريا المكورة العنقودية <a href="cat-141497.html"><a href="cat-141307.html">الذهب</a>ية</a> Staphylococcus aureus.<br/> تم تمييز سلالات البكتريا المكورة العنقودية Staphylococcus aureus المعزولة من عينات ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> <a href="cat-139234.html">ال<a href="cat-140637.html">غذائي</a>ة</a> ال<a href="cat-141047.html">مختلفة</a> عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> <a href="cat-140039.html">وجود</a> جين الجينات <a href="cat-139284.html">الأربع</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> تشفر سموم معوية (SEA،SEB، SEC،SED).<br/> <h2> الحمض النووي متعدد الاشكال والمضخم عشوائيا RAPD-PCR) ) </h2> يتم في هذه ال<a href="cat-139576.html">حالة</a> <a href="cat-140308.html">اختيار</a> قطع من الحمض النووي دون العلم بت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> مجموع مورثي الجينوم له . وعلى هذا الاساس العشوائي العشوائي يتم <a href="cat-140308.html">اختيار</a> من 6-10 أ<a href="cat-140968.html">زواج</a> من <a href="cat-140337.html">قواعد</a> الجينوم يتم تضخيمهم و تغير في شكلهم تحت ظروف صارمة و <a href="cat-141026.html">صعبة</a>. يتم <a href="cat-140856.html">الصلب</a> على العديد من ال<a href="cat-141142.html">مواقع</a> في الحمض النووي التمهيدي،و<a href="cat-140587.html">عندما</a> <a href="cat-139947.html">يكون</a> منطقتين <a href="cat-139226.html">معرض</a>تين للاشعاع ب<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> <a href="cat-141936.html">صحيح</a>ة قريبتين من بعضهما يتم تضخيم الت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> المت<a href="cat-139291.html">داخل</a> ، ال<a href="cat-141487.html">نتيجة</a> بعد فصل ال<a href="cat-141157.html">مواد</a> الهلامية على جل الاغاروز هي اختلاف في البصمات <a href="cat-139832.html">عليه</a> . العيب <a href="cat-139210.html">ال<a href="cat-139396.html">رئيس</a></a>ي في هذه ا<a href="cat-139371.html">لعمل</a>ية هو ا<a href="cat-141054.html">عادة</a> الاستنساخ . <a href="cat-140202.html">تركي</a>ز الاشعاع وطوله يحسن من الاستنساخ .<br/> ميزت ال<a href="cat-139236.html">سالم</a>ونيلا المعزولة من <a href="cat-139225.html">خلال</a> البصمة الناتجة من هذه ا<a href="cat-139371.html">لعمل</a>ية واظهرت ال<a href="cat-140483.html">نتائج</a> ال<a href="cat-140274.html">علاقة</a> بين التشكيلات الناتجة و<a href="cat-140599.html">السل</a>الات وكان <a href="cat-140564.html">هناك</a> تشابه <a href="cat-140324.html">كبير</a> في <a href="cat-141417.html">خلايا</a> <a href="cat-139526.html">الان</a>سان المعزولة و<a href="cat-141417.html">خلايا</a> <a href="cat-141568.html">الحيوانات</a> المعزولة ايضا . استخدمت هذه <a href="cat-141140.html">التقني</a>ة في تحليل سلالات معزولة من بكتيريا اليسكلوباسلس الم<a href="cat-140039.html">وجود</a>ة في <a href="cat-139172.html">عصير</a> <a href="cat-140294.html">الفاكهة</a> حيث اظهرت ال<a href="cat-140483.html">نتائج</a> انها البكتيريا السائدة بغض <a href="cat-140661.html">النظر</a> عن <a href="cat-139526.html">الان</a>واع ال<a href="cat-141047.html">مختلفة</a> في <a href="cat-139172.html">عصير</a> ال<a href="cat-141411.html">فواكه</a> .وك<a href="cat-140521.html">مؤشر</a> على الاو<a href="cat-139350.html">كرات</a>وكسين يتم تشكيل <a href="cat-141417.html">خلايا</a> معزولة من دقيق <a href="cat-141632.html">القمح</a>، وتم فصل سلالة ال بنيسيليوم البنسيليوم الثؤلولية في مجموعات وفقا لبصمتها، كما تم <a href="cat-139561.html">استخدام</a> RAPD-PCR للتمييز لسلالات بنيسيليوم البنسيليوم expansum, تم عزل هذه <a href="cat-140599.html">السل</a>الات من <a href="cat-139438.html">التفاح</a> ال<a href="cat-141465.html">سليم</a> و المتعفن, ولكن ظهرت البصمة الجينية على الرغم من الضغوط تم تصنيفها إلى مجموعتين منفصلتين، <a href="cat-140354.html">جميع</a> <a href="cat-140599.html">السل</a>الات من P.expansum ممثلة على أنها من ال<a href="cat-139541.html">أنواع</a> الخطرة.<br/> مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h1>الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> المتكررة من تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يمرات المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a></h1> <a href="cat-140780.html">يعتمد</a> على تكرار ع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي ,يتم تكرار جين الجين <a href="cat-140643.html">ال<a href="cat-140318.html">خارج</a></a>ي وتكرار الجين ال<a href="cat-139291.html">داخل</a>ي للبكتيريا و <a href="cat-140896.html">توزيع</a> وتكرار هذه الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a>من الحمض النووي المتكررة <a href="cat-139492.html">يمكن</a> دراستها مع تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يمرات المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> بادئات موجهة ظاهريا <a href="cat-139201.html">التي</a> هي محددة لع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> تكرار. إذا الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> المتكررة <a href="cat-141998.html">كانت</a> قريبة بما فيه الكفاية لبعضها البعض، ممكن أن يحدث التضخيم في ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الحمض النووي يتم فصل <a href="cat-141409.html">منتجات</a> الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> المتكررة ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> كهربائي الهلام الاغاروز . والبصمات <a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139752.html">الحصول</a> <a href="cat-140398.html"><a href="cat-139832.html">عليه</a>ا</a> تدل على سلالة م<a href="cat-141156.html">عينة</a> تتمثل ع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> BOX عنصر آخر من <a href="cat-139541.html">أنواع</a> الحمض النووي المتكرر.إذا الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> المتكررة <a href="cat-141998.html">كانت</a> قريبة بما فيه الكفاية لبعضها البعض، ممكن أن يحدث التضخيم في ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> الحمض النووي يتم فصل <a href="cat-141409.html">منتجات</a> الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> المتكررة ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> كهربائي الهلام الاغاروز والبصمات <a href="cat-139201.html">التي</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139752.html">الحصول</a> <a href="cat-140398.html"><a href="cat-139832.html">عليه</a>ا</a> تدل على سلالة م<a href="cat-141156.html">عينة</a> تتمثل ع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> BOX عنصر آخر من <a href="cat-139541.html">أنواع</a> حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي المتكرر. تكنولوجيا فحص التفاعل المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> متوفرة <a href="cat-140441.html">تجاري</a>ا ولا يستخدم <a href="cat-140492.html">فيها</a> هلام الهلام وتجمع ال<a href="cat-139411.html">بيان</a>ات الناتجة تلقائيا وتحليلها ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> <a href="cat-139179.html">برنامج</a> Diversilab المحوسب . على الرغم من <a href="cat-140774.html">اكتشاف</a> ع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي المتكررة في مجموع مورثي جينوم الكولاي وال<a href="cat-139236.html">سالم</a>ونيلا الملهبة، قد وجدت هذه الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> في وقت لاحق في عدة <a href="cat-139541.html">أنواع</a> من البكتيريا سالبة جرام و م<a href="cat-140051.html">وجبة</a> جرام. <a href="cat-141332.html">تظهر</a> <a href="cat-140354.html">جميع</a> <a href="cat-139862.html">انواع</a> ال<a href="cat-142045.html">ليست</a>يريا توافق بين جينات <a href="cat-140354.html">جميع</a> الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> المتكررة أظهرت عملية تكرار الع<a href="cat-139558.html">ناصر</a> لبكتيريا لستيريا مولدة للوحيدات ا<a href="cat-142045.html">ليست</a>ريا أن <a href="cat-140564.html">هناك</a> <a href="cat-139541.html">أنواع</a> <a href="cat-139980.html">منها</a> ... وهذه ال<a href="cat-139541.html">أنواع</a> <a href="cat-139823.html">تكون</a> وفقا للأصول <a href="cat-139201.html">التي</a> تم عزلها <a href="cat-139980.html">منها</a>.<br/> مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h1>التطبيقات</h1> <h2> <a href="cat-139193.html">علاج</a> ال<a href="cat-141417.html">خلايا</a> واستخراج الحمض النووي </h2> ال<a href="cat-139134.html">خطوة</a> <a href="cat-139483.html">الأول</a>ى في عملية <a href="cat-140273.html">التحليل</a> هي استخراج حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي (DNA) أو حمض نووي ريبوزي الحمض النووي الريبوزي (RNA) ، ونوعية <a href="cat-139568.html">العين</a>ة هي غالبا أهم عنصر لضمان استنساخ <a href="cat-140273.html">التحليل</a> و الحفاظ على المعنى البيولوجي. و<a href="cat-139128.html">تحضير</a> <a href="cat-140134.html">قالب</a> ال<a href="cat-141417.html">خلايا</a> يتطلب تمزق أو تحلل ال<a href="cat-141417.html">خلايا</a> وال<a href="cat-140880.html">فيروس</a>ات لتحرير حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي أو حمض نووي ريبوزي الحمض النووي الريبوزي حتى تخرج جزيئات الحمض النووي من النواة يجب أن يتم <a href="cat-139218.html">ازالة</a> <a href="cat-141995.html">جدار</a> الخلية عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> تحليله.<a href="cat-141054.html">عادة</a> يتم <a href="cat-140308.html">اختيار</a> ال<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ثل لتحليل الخلية <a href="cat-140270.html">بناء</a>ً على حد <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> ، ال<a href="cat-142083.html">سرعة</a>، سهولة الإعداد و <a href="cat-140914.html">الطلب</a>.<a href="cat-141145.html">فعال</a>ية هذا الاستخراج النووي <a href="cat-142038.html">تعتمد</a> على عدد من ميزات <a href="cat-141995.html">جدار</a> الخلية البكتيرية ،و <a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> ا<a href="cat-141469.html">ل<a href="cat-140353.html">معالجة</a></a> <a href="cat-141638.html">المستخدمة</a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن <a href="cat-139823.html">تكون</a> حرارية، كيميائية ، ميكانيكية، ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> المنظفات ، المذيبات ، ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> <a href="cat-139526.html">الان</a>زيمات أو صدمة <a href="cat-140321.html">الضغط</a> الإسموزي .<br/> من السهل نسبيا في <a href="cat-140779.html">الوقت</a> الحاضر فصل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي بكمية و نوعية عالية ال<a href="cat-139719.html">إنتاج</a>ية. معظم ال<a href="cat-139599.html">خطوات</a> المتبعة تستخدم مجموعات استخراج <a href="cat-141162.html"><a href="cat-140441.html">تجاري</a>ة</a> و <a href="cat-141496.html">اعتماد</a>اً على <a href="cat-140215.html">شبكة</a> <a href="cat-139587.html">ال<a href="cat-140973.html">طعام</a></a> <a href="cat-139492.html">يمكن</a> أن تعطي <a href="cat-140483.html">نتائج</a> <a href="cat-140559.html">مرضي</a>ة حسب ما يتم توفيره أو بعد بعض ال<a href="cat-140154.html">تعديل</a>ات.<a href="cat-140564.html">هناك</a> مجموعات استخراج <a href="cat-141162.html"><a href="cat-140441.html">تجاري</a>ة</a> <a href="cat-141047.html">مختلفة</a> متاحة لإستخراج حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> الكيمياء <a href="cat-140746.html">الحيوية</a> مثل د.فود(دكتور شيب <a href="cat-140417.html">بيوت</a>ك انك، مياو لي تايوان )،بريب مان)تكنولوجيا ال<a href="cat-140431.html">حياة</a>،كارلسباد،<a href="cat-141176.html">الولايات</a> <a href="cat-139421.html">المتحدة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ريكية) ،2001)،بيورجين(<a href="cat-139149.html">شركة</a> <a href="cat-140208.html">أنظمة</a> جينترا ، مينيابوليس، مينيسوتا، <a href="cat-141176.html">الولايات</a> <a href="cat-139421.html">المتحدة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ريكية)<br/> فاهل والتحقيق، سان دييغو، كاليفورنيا، <a href="cat-141176.html">الولايات</a> <a href="cat-139421.html">المتحدة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ريكية) جين-تراك (جين-تراك <a href="cat-140208.html">أنظمة</a> كورب، هوبكينتون، <a href="cat-141176.html">الولايات</a> <a href="cat-139421.html">المتحدة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ريكية باكس كو<a href="cat-140967.html">اليك</a>ون <a href="cat-139149.html">شركة</a>، ويلمنجتون، ،(داهلينوبورج DE) (بيلي، 1998)،بروبيليا (سانوفي باستور ال<a href="cat-139776.html">تشخيص</a>،مارنيس-لا-المغناج، <a href="cat-141228.html">فرنسا</a>)، وتاكمان (تقنيات ال<a href="cat-140431.html">حياة</a>، كارلسباد، <a href="cat-141176.html">الولايات</a> <a href="cat-139421.html">المتحدة</a> <a href="cat-139519.html">الأم</a>ريكية)<br/> كما تم ال<a href="cat-141613.html">إعلان</a> عن فحص تفاعلي لتاكمان للكشف عن الأنماط المصلية ل<a href="cat-140880.html">فيروس</a> الروتا في <a href="cat-139568.html">العين</a>ات السريرية و البيئية . و بعكس الحمض النووي (DNA) فإن استخراج الحمض النووي الريبوزي(RNA) <a href="cat-139334.html">أكثر</a> اجهاداً <a href="cat-139880.html">خاصة</a> <a href="cat-140587.html">عندما</a> يتم استخراجه من مركب معقد أو من الأنسجة الغشائية لل<a href="cat-141492.html">أطعمة</a> <a href="cat-140665.html">الدهنية</a>، وقد تم <a href="cat-140505.html">تطوير</a> بعض <a href="cat-141882.html">أساليب</a> الاستخراج <a href="cat-139201.html">التي</a> تتوافق مع النسخ العكسي المتتابع لتفلعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> (QPCR) لمختلف ال<a href="cat-141492.html">أطعمة</a>. نظراً للتحلل ال<a href="cat-140386.html">سريع</a> للحمض الريبوزي ( حمض نووي ريبوزي RNA )فلابد من تحليله ب<a href="cat-142083.html">سرعة</a> . ال<a href="cat-139734.html">م<a href="cat-141343.html">رحلة</a></a> ال<a href="cat-140957.html">نهائي</a>ة من إعداد <a href="cat-139361.html">نموذج</a> (عزل وتنقية الحمض النووي) <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-139561.html">استخدام</a>ها مع مركب من طرد <a href="cat-139157.html">مركز</a>ي تبايني الطرد <a href="cat-139595.html">ال<a href="cat-139157.html">مركز</a></a>ي المكثف والتنقية عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> الإستخراج <a href="cat-141644.html"><a href="cat-141264.html">اللون</a>ي</a> ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> الفينول كلوروفورم، وهطول <a href="cat-139519.html">الأم</a>طار مع الإيثانول، وال<a href="cat-139193.html">علاج</a> مع إنزيم الأنزيمات (على سبيل المثال lizocim). ال<a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> ال<a href="cat-139334.html">أكثر</a> فاعلية <a href="cat-141003.html">ل<a href="cat-140458.html">إزالة</a></a> ما تبقى من الشوائب ال<a href="cat-140948.html">أخرى</a> مع ال<a href="cat-140202.html">تركي</a>ز أيضا على <a href="cat-139568.html">العين</a>ة هو الاستخراج مع المذيبات العضوية و ترسيب الحمض النووي ب<a href="cat-139561.html">استخدام</a> إيثانول الإيثانول .<br/> مرجع <a href="cat-139415.html">كتاب</a> المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> Polymerase Chain Reaction<br/> <a href="cat-139592.html">الطب</a>عة <br/> الصفحة <br/> سنة <br/> الناشر intechopen<br/> الرقم المعياري 978-953-51-0612-8<br/> <a href="cat-139689.html">تاريخ</a> الوصول 30, May, <br/> المكان <br/> اللغة الإنكليزية<br/> ال<a href="cat-139195.html">عنوان</a> ب<a href="cat-139359.html">ال<a href="cat-141337.html">عربي</a></a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <br/> <h2> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرازالمت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> القائم على <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن البكتيريا <a href="cat-139201.html">التي</a> تنتقل عن <a href="cat-139197.html">طريق</a> <a href="cat-140006.html">الأغذية</a> </h2> <a href="cat-140564.html">هناك</a> العديد من <a href="cat-139615.html">الطرق</a> <a href="cat-140139.html">المعتمدة</a> على تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> للكشف عن كائن حي دقيق الكائنات الحية الدقيقة <a href="cat-139201.html">التي</a> ورد ذكرها في ال<a href="cat-139415.html">كتاب</a>ات ال<a href="cat-139353.html"><a href="cat-140200.html">علمي</a>ة</a>. و<a href="cat-140564.html">هناك</a> أيضا عدد من المقايسات المتاحة <a href="cat-140441.html">تجاري</a>ا ال<a href="cat-141017.html">قائمة</a> على فحص تفاعل البلوليميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <a href="cat-139201.html">التي</a> تملك الملاءمة لتوفير الكواشف وال<a href="cat-141840.html">ضوابط</a> <a href="cat-139718.html">اللازمة</a> ل<a href="cat-141850.html">إجراء</a> <a href="cat-141081.html">الفحص</a> و<a href="cat-139201.html">التي</a> يبدو أن لها <a href="cat-140577.html">حساسية</a> عالية للكشف عن تلوث كائن حي دقيق الكائنات الحية الدقيقة .<br/> <h2> الت<a href="cat-140324.html">كبير</a> والتقدير الكمي للدنا </h2> <h2> <a href="cat-139776.html">تشخيص</a> ال<a href="cat-139358.html">أمراض</a> </h2> <h2> تستخدم في <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن الفايروسات في شريط <a href="cat-140500.html">الحامض</a> <a href="cat-139516.html">الام</a>يني </h2> <h2> تستخدم في الادله الجنائية وقضايا تحديد النسب </h2> <h2> تستخدم في البصمة </h2> <h2> تستخدم ل<a href="cat-140937.html">معرفة</a> طول شريط DNA </h2> <h2> تستخدم لتحديد <a href="cat-139972.html">موقع</a> جين معين ضمن <a href="cat-141896.html"><a href="cat-141272.html">سلسل</a>ة</a> من الجينات </h2> <h2> تستخدم في <a href="cat-141440.html">الكشف</a> عن الطفرات الوراثية </h2> <h1>ال<a href="cat-140154.html">تعديل</a>ات في التكنيك الأساسي</h1> <h1><a href="cat-139689.html">تاريخ</a></h1> <h2> حروب براءات الاختراع </h2> PCR tubes.png 250 أنابيب بلا<a href="cat-139936.html">ستيك</a>ية يحوي كل <a href="cat-139980.html">منها</a> على 100خ¼l من مزيج تفاعل PCR <br/> G-Storm thermal cycler ت<a href="cat-141477.html">صغير</a> <a href="cat-140346.html">جهاز</a> <a href="cat-141161.html">اختبار</a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميرز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> PCR <br/> <strong>تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميراز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a></strong> إنج Polymerase chain reaction هي <a href="cat-139125.html"><a href="cat-139197.html">طريق</a>ة</a> مستخدمة بكثرة في علم الأحياء الجزيئي البيولوجيا الجزيئية . يشتق اسمه من إحدى ع<a href="cat-139558.html">ناصر</a>ه <a href="cat-141780.html">الأساسية</a> وهو دنا بوليميريز و<a href="cat-139580.html">الذي</a> يستخدم لتكثير و تكوين نسخ <a href="cat-141907.html">عديدة</a> من قطعة من حمض نووي ريبي منقوص الأكسجين الحمض النووي من <a href="cat-139225.html">خلال</a> تناسخ إنزيم ي <a href="cat-140318.html">خارج</a> الكائنات الحية. <a href="cat-140587.html">عندما</a> ي<a href="cat-140177.html">تطور</a> التفاعل، فإن الحمض النووي ال<a href="cat-139282.html">مصنع</a> يستخدم ك<a href="cat-140134.html">قالب</a> للتناسخ. وذلك يُنشط تفاعل ت<a href="cat-141272.html">سلسل</a>ي تفاعل مت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> و<a href="cat-139580.html">الذي</a> يحدث فيه ت<a href="cat-140324.html">كبير</a> نمو أسي أسي ل<a href="cat-140134.html">قالب</a> DNA. من الممكن، من <a href="cat-139225.html">خلال</a> هذا التفاعل عمل <a href="cat-141506.html">ملايين</a> النسخ لقطعة مفردة من الدنا أو عدة قطع. <a href="cat-139492.html">يمكن</a> <a href="cat-140154.html">تعديل</a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميريز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <a href="cat-139371.html">لعمل</a> هندسة وراثية <a href="cat-140154.html">تعديل</a>ات وراثية <a href="cat-141907.html">عديدة</a>.<br/><br/> تستخدم كل تطبيقات تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميريز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> دنا بوليمريز مستقر حراريا، مثل تاك بوليمريز وهو إنزيم عزل من بكتيريا بكتريا مستحرة مائية المستحرة المائية . يعمل هذا الإنزيم على ت<a href="cat-140354.html">جميع</a> خيط دنا <a href="cat-139413.html">جديد</a> من نوكليوتيد النيوكليوتيدات (<a href="cat-140586.html">مكعبات</a> <a href="cat-140270.html">بناء</a> الدنا)، وذلك باست<a href="cat-141028.html">عمال</a> خيط دنا مفرد ك<a href="cat-140134.html">قالب</a> و <a href="cat-142088.html">قليل</a> النيكليوتيدات <a href="cat-142088.html">قليل</a>ات النيوكليوتيدات (تسمى أيضا مشرع بوادئ الدنا ) وهي مطلوبة لبدأ <a href="cat-139960.html">تصنيع</a> الدنا. معظم طرق تفاعل البلمرة المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> تستخدم مدور حراري التدوير <a href="cat-141460.html">الحر</a>اري بمعنى أنه يتم تسخين وتبريد <a href="cat-141156.html">عينة</a> تفاعل <a href="cat-139575.html">البول</a>يميريز المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> وذلك <a href="cat-142078.html">طبقا</a> ل<a href="cat-141896.html"><a href="cat-141272.html">سلسل</a>ة</a> <a href="cat-139599.html">خطوات</a> حرارية محددة.<br/> وضعت في عام 1983 من قبل <a href="cat-142092.html">كاري</a> موليس ، والآن هذه <a href="cat-141140.html">التقني</a>ة لا يستغنى <a href="cat-139156.html">عنها</a> في كثير من الأحيان ويتم استخدمها في <a href="cat-141764.html">مختبر</a>ات البحوث <a href="cat-139209.html"><a href="cat-139592.html">الطب</a>ي</a>ة والبيولوجية ل<a href="cat-139302.html">مجموعة</a> <a href="cat-141661.html">متنوعة</a> من التطبيقات وتشمل هذه استنساخ DNA المت<a href="cat-141272.html">سلسل</a> <a href="cat-140139.html">المعتمدة</a> على الحمض النووي , علم الوراثة <a href="cat-141315.html">العرق</a>ي ، أو <a href="cat-140273.html">التحليل</a> الوظيفي من الجينات ، و<a href="cat-139776.html">تشخيص</a> ال<a href="cat-139358.html">أمراض</a> الوراثية ، وتحديد بصمات الوراثية (<a href="cat-141638.html">المستخدمة</a> في علوم <a href="cat-139592.html">الطب</a> <a href="cat-140931.html">الشرع</a>ي و <a href="cat-141161.html">اختبار</a> الأبوة )، وكشف و<a href="cat-139776.html">تشخيص</a> ال<a href="cat-139358.html">أمراض</a> المعدية , في عام 1993، حصل على <a href="cat-140613.html">جائزة</a> موليس على <a href="cat-140613.html">جائزة</a> نوبل في الكيمياء مع مايكل سميث <a href="cat-139371.html">لعمل</a>ه على PCR<br/>
اسمك الكريم
شكوى او ملاحظاتك للمشرف
اكتب الارقام الموجوده بالصورة بالفراغ تحتها

اعلانات

شاركنا رأيك بالموضوع

الخطوات

تحسين التفاعل

يتم في بداية الامر ادخال شريط DNA المراد مسخه مع البادئ (primers) وكذلك بوجود انزيم DNA polymerase والقواعد النتروجينه في انوبة صغيره تسمى eppender tube وتمر بثلاث مراحل متتالية

م رحلة المسخ او التفكك وتحدث في درجة حرارة بين 94-98 م حيث يبدأ شريط DNA بالانقسام إلى خيطين منفصلين عن بعض وتحدث خلال فترة زمنية بين 1 - 9 دقائق

م رحلة الالتصاق وفي هذه الم رحلة يبدأ البادئ بالاتصاق على خيط DNA وتتم بدرجة حراريه اقل من م رحلة التفكك 50 - 65 ° س، وتتم تقريباً خلال ظ¥ ثواني

م رحلة التمدد او ال بناء تعد هذه الم رحلة الاخيرة في عملية المسخ وتحدث في درجة 75–80 °س، وهذه هي الدرجة الحرارية المناسبة لعمل الانزيم DNA polymerase لتقوم ببناء خيط الحامض النووي الجديد

هذه المراحل الثلاث تعتبر دوره واحد يصبح فيها الحامض قد تضاعف إلى نسختين ، ان اساس مبدأ عمل ال PCR هو الاعتماد على الدورة الحرارية التي تستخدم الديناميكا الحرارية من تفاعلات الحمض النووي عن طريق تناوب التسخين والتبريد لعينات ال PCR بعد تحديد درجات الحرارة . وهذه العملية تمكن من فصل فرعي الحمض النووي الحلزوني المزدوج في درجة حرارة عالية (DNA melting) وتحت درجات الحرارة المنخفضة فان كل فرع من حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي يستخدم بواسطة انزيمات بلمرة الحمض النووي لانتاج تركيب جديد كامل منه. كل دورة من PCR تضم ثلاث عمليات مختلفة في دورة درجة الحرارة (( t perature cycling اولا التمسخ (denaturation) او تذويب الحمض النووي حيث يفصل ال DNA الي قطعتين (ssDNA) من خلال كسر الرابطة الهيدروجينية بين ازواج القواعد . تعتبر هذه الخطوة قصيرة لانها تحتاج ما بين 10 ثانية و 30 ثانية في 92 درجة مئوية إلى 96 درجة مئوية . اما الخطوة الثانية الصلب ( annealing) يتم صلب ال DNA الاولي لانتاج سلاسل مكملة ل (ssDNA) من خلال تشكيل رابطة هيدروجينية روابط هيدروجينية بالتالي ينتج اثنين من dsDNA جديد وهذه الاجزاء القصيرة تؤدي في نهايتها الي تشكيل الحمض النووي الجديد . اما الخطوة الثالثة الاستطالة (elongation) وتسمى ايضا التكرار الانزيمي يتم فيها اتحاد ايونات موجبة كعامل محفز والكمية المطلوبة من مكملة ال deoxynucleotides (dNTPs) . وانزيم بلمرة ال DNAيبدا بتكرار ال DNA في ال موقع التمهيدي . وتستمر هذه العمليات باعادة تسخين ال dsDNA وفصله مرة اخرى .في كل دورة PCR يزداد جزء الحمض النووي زيادة أسية وفقا لاللأس 2 (يعني ان الواحد يصبح اثنان والاثنان اربعة ثم ثمانية…) .بما ان هذه العملية تستخدم لتضخيم الحمض النووي فان من 35 الى 40 دورة نحتاجها ل تقديم ما يكفي من عينة ال DNAللتحليل .

بحتاج بوليمر الحمض النووي الى محفز على شكل كيتون كيتونات ثنائية التكافؤ وهي اما مغنسيوم المغنيسيوم او منغنيز المنغنيز . تستخدم هذه المحفزات ايضا كعامل مساعد في تفاعل البوليمرات المتسلسل . التركيز الطببيعي للمنغنيز هو 2.5 مايكرومتر . المشعلات هي أليغونيوكليوتايد (في PCR، وتستخدم أزواج التمهيدي) التي تمت إضافتها على شكل قطع مصنعة صغيرة من حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي والتي تحتوي على متتاليات مكملة للمنطقة المستهدفة لجزيء الحمض النووي المستهدف. المشعلات تصلب للجزء النهائي من التسلسل المستهدف ليتم تضخيمها. هذه المشعلات هي المكونات ال رئيسية للتضخيم الانتقائي و المكرر لقطع الحمض النووي المستهدفة ضمن مجموعة من الأحماض النووية, و هي عادة ما تتكون من 20-25 من القواعد الطويلة, و ما لا يزيد عن 30 قاعدة طويلة. وتستخدم مجموعة معينة من المشعلات لتضخيم ناتج واحد من تفاعل البلمرة المتسلسل. واحدة من المشعلات يصلب إلى حبلا في الأمام والأخرى إلى الحبل العكسي من جزيئات الحمض النووي خلال خطوة الصلب. المشعلات انفسهم يتم تصنيعهم و تجميعهم غالبا من Phosphoramidites نيوكليوزيد مفرد, ب طريقة تسلسل معين. هذه المشعلات بالتالي ترتبط بسهولة بالحمض النووي المكتمل والخاص بها, أو بجدائل الحمض النووي الريبي في تسلسل محدد, لتشكيل الدوبلكس, أو أقل في كثير من الأحيان, الهجينة لمرتبة أعلى. على هذا النحو، المشعلات لازمة لبدء تركيب الحمض النووي, وبالتالي فانها تسمح لبوليميريز الحمض النووي لتمديد أليغنوكليوتيد و تكرار حبلا التكميلية. بوليمبريزالحمض النووي يبدأ التكرار في 3'-نهاية التمهيدي، ويكمل حبلا المعاكس. والتمهيدي( المشعل) مع درجة الحرارة الصلب أعلى بكثير من درجة حرارة التفاعل الصلب مع درجة الحرارة الصلب أعلى بكثير من درجة حرارة التفاعل الصلب يمكن أن تفوت-hybridise وتمدد حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي في مكان غير صحيح على طول تسلسل الحمض النووي ، بينما عند درجة حرارة أقل بكثير من درجة حرارة الصلب، يمكن أن تفشل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي ليصلب ويتوسع على الإطلاق. تحتاج متواليات المشعل ( التمهيدي ) أيضا أن يتم اختياره لتحديد فريد لمنطقة من الحمض النووي، وتجنب إمكانية تفويت-تهجين لتسلسل مماثل قريب. وهكذا صممت هذه البادئات باستخدام أدوات محددة، مثل برنامج التمهيدي اكسبرس (الحياة تكنولوجيز، كارلسباد، الولايات المتحدة الأمريكية)، أو غيرها. وهناك طريقة شائعة الاستخدام في تصميم التمهيدي تنطوي على بحث الانفجار, الذي هو أداة بحث في قاعدة بيانات بنك الجينات , حيث وينظر إلى كل من المناطق المحتملة التي يمكن للتمهيدي ( المشعل ) الربط بها. أيضا ينبغي تجنب تكرار في المشعلات, لأن تشكل حلقة قد يحدث, و التي يمكن أن تسهم في تفويت التهجين.

مرجع كتاب
المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

المبادئ الكمية لتفاعل البولميرات المتسلسل

على مر السنوات القليلة الماضية ؛ تمت عملية تطوير الادوات والاجهزة التي ادت الى الى توسيع نطاق تفاعل البوليمرات المتسلسل الذي تمكن من الكشف عن منتوجات ال(Q-PCR / QRT) والذي يعرف ايضا باسم (PCR (QPCR وهذا الجهاز الذي يعتبر من اكثر الاجهزه نفوذا في عالم علم الأحياء الجزيئي البيولوجيا الجزئية . وبالنسبة لهذه المتواليات المحددة داخل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي أوالتي تعمل كقالب [ يمكن نسخها، أو تضخيم ، بما يصل الى عدة آلاف من أمثالها او ما يصل الى مليون من الاضعاف في التقليدية PCR،كما يستخدم PCR للكشف الكمي والنوعي لتسلسل تضخيمها للوقت الحقيقي وهوه (QPCR). كما ينطوي على تحليل PCR بعد ان يتم (الهلام الكهربائي وتحليل الصور على النحو الوارد اعلاه) ففي هذه العملية يتم قياس كمية النتج من PCR في كل دورة. وهذه القدرة على رصد رد الفعل خلال مرحلته الاسية تمكن المستخدم من تحديد المبلغ الاولي للهدف بدقة كبيرة . كما ان الكمية يمكن ان تكون اما العدد المطلق للنسخ او الكمية القريبة وعندما تطبع لادخال الحمض النووي او الجينات تطبع تطبييع اضافي.

المكونات الاساسية في قياس PCR، والاختلافات الوحيدة هي في كشف (مضان صبغ) الذي يعمل على تضخيم الهدف،وشرط لمنصة أجهزة معينة. تتكون أجهزة QPCR من دائري حراري، جهاز كمبيوتر، و البصريات لمضان

الإثارة وجمع الانبعاثات (أ مقياس التألق)، والحصول على البيانات وتحليل البرمجيات. ويمكن الكشف عن الهدف المتضخم بطريقتين مختلفتين الأولى، مع دون تحديد الأصباغ الفلورية أن يقحم مع أي dsDNA. والثانية، مع تسلسل محدد تحقيقات حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي التي تتكون من أليغنوكليوتيد] التي وصفت مع صبغة الفلور الصبغة التي تسمح بظهور الشكل، وبالتالي يتم الكشف عنه، إلا أن الحمض النووي الذي يحتوي هدف التسلسل. مع استخدام فلوري غير محدد الأصباغ زيادة في QPCR المنتج خلال QPCR يؤدي إلى زيادة في كثافة مضان التي تقاس في كل دورة، مما يسمح لتراكيز dsDNA ليكون كميا. ومع ذلك، إذا كان تحديد من QPCR محدودة حيث أن هذه الأصباغ وربط كل من dsDNA المنتجة داخل وQPCR. والأصباغ الفلورية وبالتالي غير محددة تقيس ليس فقط QPCR المطلوب المنتجات، ولكن أيضا منتجات PCR غير محددة (بما في ذلك dimers التمهيدي على سبيل المثال).

هذا يمكن ان يؤدي الى تداخل ، أو منع التقدير الدقيق للهدف المقصود (تسلسل). والكشف الأكثر تحديدا الممكن هوه استخدام اختبار حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي DNAذا تسلسل معين، والذي فقط يكشف عن تسلسل الحمض النووي الهدف. استخدام هذه التحقيقات يؤدي الى زيادة كبيرة في خصوصية الكشف وحساسية ال طريقة، وكما يسمح هذا الكم حتى في وجود تضخيم الحمض النووي غير محدد.

المجموعة المتنوعة من التحقيقات المختلفة تستخدم الآن (جزيئية المنارة، عقرب التحقيق، وغيرها)، على الرغم من أن تلك هي الطرق الأكثر شيوعا المستخدمة الا انه يوجد ايضا التحقيقات المائية (تحقيقات TAQMAN) وهوه المسمى مسبار المائي مع مراسل فلوري في نهاية 5' ومع جزيء يعرف باسم 'فاكهه تقضي في دورته الطرف المقابل. عند التحقيق السليم، وعلى مقربة من مراسل و فاكهه تقضي يمنع الكشف عن مضان المراسل. هذا التبريد لمراسل مضان من قبل فاكهه تقضي يحدث من خلال عملية الرنين مضان لنقل الطاقة. كما ان حصيلة تفاعل PCR، خلال الم رحلة الصلبة، الاشعال والتحقيق في التهجين إلى شريطا ssDNA مكملة ومراسل المضان يبقى مطفأ. بدء التالية من بلمرة الحمض النووي الجديد شريطان من الاشعال، بوليميريز الحامض النووي ثم يصل التحقيق لهاعند 5'-3'-

النشاط الانوية ال خارجية يحط التحقيق.

وبعد انبعاث المصدرالمنفصل يمكن بعد ذلك ان يتم الكشف عن المراسل الفلوري بعد الإثارة مع المصدر المناسب لضوء، مما يؤدي إلى زيادة في مضان. وتجدر الإشارة الى ان التحقيقات مختلفة في التسميات بسبب ان مضان الصبغة يمكن استخدامها في فحوصات متعددة للكشف عن العديد من الأحماض النووية في رد فعل QPCR واحد.

لفهم فوائد QPCR، لمحة عامة عن أساسيات PCR الضرورية.

في بداية رد فعل PCR، الكواشف هي الإفراط في القالب وتراكيز الكافية لل منتجات هي في أدنى مستوى ولاستعادة الطبيعة للمنتج فلا يجب التنافس مع التمهيدي الملزم، وعائدات التضخيم في الثابت الأسي ومعدل.

النقطة التي معدل التفاعل يتوقف عن أن يكون الأسي ويدخل م رحلة خطية من التضخيم هي المتغير العالي، حتى بين العينات تتكرر. ثم، في دورة لاحقة، والتضخيم يتم كقطرات معدل الصفر القريب (تصل إلى القمة)، وأكثر من ذلك بقليل المنتج PCR. لتصل للدقة المتناهية، فإنه من الضروري جمع البيانات الكمية في النقطة التي كل عينة في م رحلة الأسي من التضخيم. وتحليل ردود الأفعال خلال الم رحلة الأسية في عدد الدورات المعينة ينبغي أن توفر نظريا عدة أوامر من حجم النطاق الديناميكي، والتي تكون عادة 5-9 أوامر من الحجم الكمي. مضان من المنتجات PCR لكل عينة في كل دورة يتم الكشف عنه ويقاس في جهاز QPCR، وزيادة للهندسية لها أن يتوافق معه.

يتم استخدام الزيادة الهائلة للمنتج لتحديد دورة العتبة في كل رد فعل. ويعتبر هذا مضان التي تم جمعها عن رد فعل إيجابي QPCR في الواقع بمثابة عملية التضخيم السيني، حيث يتم رسم مضان في عدد من الدورات.وأجزاء مختلفة من منحنيات التضخيم مهمة. يمثل الأساس ليتم طرح مستوى الضوضاء في الدورات الاولى، وهذا من مضان الحصول عليها من منتجات PCR. العتبة هو المستوى الذي يتم تعديله لقيمة أعلى من خط الأساس الذي يجب أن يكون موجودا في الم رحلة الأسية من عملية التضخيم، ودورة عتبة (CT) هو الدورة التي مؤامرة التضخيم يعبر عتبة . منحنى قياسي يمكن استخلاصها من التخفيفات لتسلسل من عينة إيجابية.

هناك العديد من التطبيقات لQPCR. وهي تستخدم عادة لكلا الأساسية والبحث و التشخيص. يستخدم التشخيص QPCR للكشف عن سرعة الأحماض النووية التي تستخدم في التشخيص، على سبيل المثال، الأمراض المعدية، وأمراض السرطان او تشوهات وراثية.

مرجع كتاب
المؤلف Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

تثبيط تفاعل البلمرة المتسلسل

يمكن تحديد استخدام النسخ العكسي لتفاعل البلمرةالمتسلسل التقليدي باستخدام مثبطات التفاعل البلمرة المتسلسل. هذا هو الحال بشكل خاص عندما يتم تطبيق تقنيات مباشرة لعينات بيولوجية معقدة للكشف عن الكائنات الحية الدقيقة، مثل السريرية والبيئية وعينات المواد ال غذائية .مثبطات تفاعل البلمرة المتسلسل يمكن أن تنشأ من العينة نفسها أو كنتيجة لل طريقة التي استخدمت لجمع أو تحضير العينة . وفي كلتا الحالتين، يمكن للمثبطات الحد بشكل كبير من الحساسية وتوسيع كفاءة تفاعل البلمرة المتسلسل. تثبيط النسخ العكسي لتفاعل البلمرة المتسلسل يعرض استفسارات إضافية ، بما ان اختلافات طفيفة في فعالية التضخيم بين العينات يمكن أن تؤثر بشكل كبير على دقة تقدير قالب النسخ .

أنواع مثبطات تفاعل البلمرة المتسلسل

عينات المواد ال غذائية تنتج بعض المشاكل ال رئيسية المرتبطة باستخدام فحوصات تفاعل البلمرة المتسلسل نظراً لمختلف مثبطاته التي يمكن العثور عليها في هذه العينات. من ناحية أخرى ، فإنه لا بد من توفير طريقة لديها بروتوكول مرن يمكن تطبيقه على العديد من أنواع الأنسجة الغشائية ل إزالة هذه المواد المثبطة بفاعلية والتي تتداخل مع توسيع تفاعل البوليميرازالمتسلسل . ويمكن لمثبطات تفاعل البلمرة المتسلسل أن تنشأ من العينة الأصلية أو من تحضير العينة مسبقاً قبل تفاعل البلمرة المتسلسل . يمكن تثبيط تفاعل البلمرة المتسلسل عن طريق تحديد فعالية إنزيم بلمرة الحمض النووي( الثابت ب الحرارة)،و تحطيم أو القبض على حمض نووي الأحماض النووية ، و ال تدخل في تحلل الخلايا.

النتائج السلبية الخاطئة يمكن أيضا أن تحدث بسبب تحلل تسلسل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي المستهدف في العينة. يمكن للمشكلة أن تزيد مع عزل البكتيريا أو الحمض النووي البكتيري مباشرةً من الأنسجة الغشائية لل مواد ال غذائية ،مع عدم وجود بروتوكول لتحضير عينة واحدة عرف بالعمل من أجل كل تطبيق . عندما يكون الهدف من تفاعل البوليميرازالمتسلسل هو الكائنات الحية الدقيقة، هناك خطوة تخصيب يمكن تضمينها إذا كانت الكائنات الدقيقة موجودة بأعداد قليلة جدا، على الرغم من أن معظم مرق التخصيب وأوساط الآغار الانتقائية تحتوي على مواد تثبط تفاعل البوليميرازالمتسلسل. الخطوة المهمة هي غسل الخلايا التي تم جمعها من التخصيب أو وسط الآغار بواسطة تكويرهم باستخدام طرد مركزي الطرد ال مركزي ، وإزالة الطافي منها ، وإ عادة تعليق الخلايا في ال مياه المالحة أو ال مياه لاستخراج حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي . تطبيق بروتوكول إعداد جيد للعينة سوف يركز على تجميع البكتيريا، إزالة المثبطات الكامنة في المواد ال غذائية و أوساط التنبيت، و تركيز الحمض النووي المستخرج . من المهم ذكر أنه تم العثور على مثبطات تفاعل البلمرة المتسلسل في جميع أنواع المواد ال غذائية، بما في ذلك اللحوم وال حليب والأجبان والتوابل.

وتشمل هذه المواد كلوريد الصوديوم NaCl، كلوريد البوتاسيوم KCl، منظفات أيونية مثل deoxycholate الصوديوم، sarkosyl، كبريتات الصوديوم دوديسيل، و إيثانول الإيثانول ، الأيزوبروبانول، الفينول، زيلين، cyanol، وبرموفينول الأزرق.
عندما يشتبه بتثبيط تفاعل البوليميرازالمتسلسل، أبسط مسار للعمل هو تمييع القالب (وبالتالي أيضا أي مثبطات)، والاستفادة من حساسية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR.

التثبيط هو مشكلة في العديد من تطبيقات تفاعل البوليميرازالمتسلسل PCR، لا سيما تلك التي تحتوي على كميات قليلة من قالب الحمض النووي أو قالب حمض نووي محطم، عندما يكون ببساطة تمييع الاستخراج غير مرغوب به.

في مستوى تجارب PCR المعيارية، النتائج السلبية أو عوائد منتجات منخفضة بشكل غير متوقع يمكن أن يكونا مؤشرا على التثبيط، شريطة أن القالب يجب أن يكون معروف أنه موجود. بدلا من ذلك، كمية معروفة من حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي غير الذاتية يمكن أن تضاف إلى عينة وتضخم كسيطرة إيجابية داخلية.

هذه الضوابط يمكن استخدامها في تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي QPCR، مزودة تقييمات كمية لأدائها. واستنادا إلى عرض نماذج التفاعلات الحركية الفردية، وظأو حساب كفاءة التضخيم، QPCR يسمح بالتعرف على للعينات المثبطة دون الحاجة إلى توسيع داخلي إضافي متحكم به

استخدام انزيم بلمرة DNA، الذي هو أقل عرضة للآثار من المواد المثبطة، هو حل ممكن لبعض مشاكل تفاعل البلوليميراز المتسلسل PCR. على سبيل المثال، فإن عددا من انزيمات بلمرة ال DNA الأحدث ، مثل Tfl وrTth، هم أكثر موثوقية من الانزيم المبلمر Taq عند استخدام قوالب PCR مصنوعة من عينات لحمة أو جبنة. بالإضافة إلى ذلك، إن نشاط انزيم بلمرة DNA في حالة وجود مثبطات يمكن أن يتم تحسينه باستخدام بعض الميسرات كالمصل البقري ألبومين albumin، ثنائي ميثيل سلفوكسيد dimethyl sulfoxide، توين 20، تريتون-X والبيتين betaine.

العديد من المثبطات الكامنة لتفاعل البلمرة المتسلسل لم يتم التعرف عليها على الرغم من أن بعضها معروف. على سبيل المثال ال حليب يحتوي على مستوى عالٍ من الأيونات الموجبة (2+Ca)، الأنزيمات الهاضمة للبروتين ، والإنزيمات الهاضمة للحموض النووية ،الأحماض الدهنية و الحمض النووي. وقد أظهرت الدراسات أن مستويات عالية من الزيت و ملح ال طعام الملح ، و سكريات الكربوهيدرات، و حمض أميني الأحماض الأمينية ليس لها أي آثار مثبطة؛ بينما الكاسيين هيدروليستات(المادة الناتجة من تحلل بروتين الكاسيين الموجود في ال حليب) ،Ca+2 ،و مكونات معينة من المرق المخصبة هي المثبطة لتفاعل البلمرة المتسلسل . بالإضافة الى، الهيم، أملاح الصفراء، والأحماض الدهنية، والأجسام المضادة، والكولاجين ومثبطات تفاعل البلمرة المتسلسل التي يمكن العثور عليها في عينات اللحوم و كبد الكبد . هذه المثبطات تمتلك تأثيرات متفاوتة على تفاعل البلمرة المتسلسل، وإن كانت بشكل عام ستجعل الكشف عن الأعداد القليلة من بكتيريا البكتيريا أو فيروس الفيروسات أكثر صعوبةً. مصدر مهم آخر من مثبطات تفاعل البلمرة المتسلسل هو المواد والكواشف التي تتلامس مع العينات أثناء معالجتها أو تنقية حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي .
مرجع كتاب
المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

أساليب كتابة تفاعل البوليمراز المتسلسل PCR

توصيف الجراثيم يعزل أدناه الأنواع، مستوى الأنواع يقوم بتحديد السلالات. أساليب الكتابة التي تصف الاختلافات بين الأنواع للكائن الحي يمكن أن تكون هامة لأسباب عديدة البحث عن أصل تفشي الأمراض المعدية (مثلا ال طعام الملوث)؛ وهي تقوم بتربط ال حالات فردية بالتفشي، دراسة الاختلافات في الإمراضية، مقدار حدة فيروس الفيروس والمقاومة بالطرق البيولوجية. كل هذا للبحث عن طرق لتعقب لتلوث الأغذية أو تتنع مصدر ميكروب الميكروبات ، واختيار بيئة بدائية لزرع الميكروبات وفحصها.

على مدى السنوات ال 25 الماضية، تطور تقنيات جزيئية مختلفة لدراسة مجموع مورثي جينوم الميكروبيات أدى إلى زيادة كبيرة في طرق كتابة ميكروب الميكروبات . ال طريقة الأمثل للكتابة هي تسلسل الحمض النووي DNA sequence، التي تسمح بالتفريق الدقيق بين السلالات. إن هذه ال طريقة مكلفة نسبيا، وهناك الكثير من أساليب الكتابة المعتمدة على حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي يتم استخدامها، وبعضها يمكن استخدامها مع تحليل PCR.

مرجع كتاب
المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

نمط التضخيم

عبر أي صنف من أصناف ميكروب الميكروبات ، الجينات المختلفة يمكن أن تكون متغيرة بشكل خاص، وبالتالي فإنها يمكن أن تستخدم لتحديد السلالة ضمن أصناف ميكروب الميكروبات .

تفاعل البلوليميراز المتسلسل متعدد الإرسال mPCR يقدم واحدة من الاحتمالات لفحص الجينات مختلفة. يوفر mPCR إمكانية تحليل متزامن للجينات المختلفة. هذه الجينات يمكن أن ترتبط بخبث الميكروب، والسموم، ومقاومته لمضادات الميكروبات، أو غيرها من الصفات للسلالات المختلفة. وجود أو غياب عوامل وراثية مختلفة يمكن الكشف عنها عن طريق mPCR، والتي يمكنها بعد ذلك تقديم التمايز للسلالات. تحليلmPCR amplicons يمكن أن تأديتها مع مادة هلامية كهربائية أو مباشرة عن طريق تفاعل البوليميرازالمتسلسل الكمي qPCR.

قام اكيبا وآخرون عام بتطبيق mPCR من أجل التعرف على السلالات ال رئيسية السبعة لل السالمونيلا (التيفية الفأرية، كوليرا، الطفلية، الهدار، الملهبة، دبلن وال دجاجي). لهذا mPCR، قاموا بشمل أحماض نووية من جين البداية invA للسالمونيلا مع جين جينات البداية المختصة ب serovar. باستخدام جينات البداية التي تستهدف جينات الخبث الستة (fliC, stx1, stx2, eae, rfbE, hlyA) في mPCR، هذا سمح بتمايز سلالات E. coli O157 H7 من الأنماط المصلية O25، O26، O55، O78، O103، O111، O127 وO145. كما تم التفريق بين سلالات يرسينيا القولون باستخدام mPCR، وفقا لوجود أو عدم وجود جين الجينات التي تشفر الخصائص المرتبطة الفوعة (الخبث)، من خلال استهداف جينات ystA، ail، myfA، و virF.

لقد تم تطوير تفاعل البلمرة المتسلسل متعدد الإرسال mPCR في دراسة أجراها Kérouanton وزملائه ك طريقة بديلة و سريعة لمصل لستيريا مولدة للوحيدات الليستيريا Listeria monocytogenes serotyping. قام ساكاي وآخرون عام بكتابة سلالات المكورات العنقودية الذهبية (Staphylococcus aureus) بواسطة النظام الذي استخدم ثلاثة mPCRs على أساس تسلسل نوكليوتيد النوكليوتيدات للجينات المخثرة. هذا النظام سمح بالتمييز بين ثمانية أنواع رئيسية للبكتيريا العنقودية المخثرة staphylocoagulase (أنواع (l-Vlll، وثلاثة أنواع فرعية (VIa–VIc)، وهذا يمثل طريقة سريعة يمكن استخدامها كأداة الوبائية لعدوى بكتريا المكورة العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus.

تم تمييز سلالات البكتريا المكورة العنقودية Staphylococcus aureus المعزولة من عينات المواد ال غذائية المختلفة عن طريق وجود جين الجينات الأربع التي تشفر سموم معوية (SEA،SEB، SEC،SED).

الحمض النووي متعدد الاشكال والمضخم عشوائيا RAPD-PCR) )

يتم في هذه الحالة اختيار قطع من الحمض النووي دون العلم بتسلسل مجموع مورثي الجينوم له . وعلى هذا الاساس العشوائي العشوائي يتم اختيار من 6-10 أزواج من قواعد الجينوم يتم تضخيمهم و تغير في شكلهم تحت ظروف صارمة و صعبة. يتم الصلب على العديد من المواقع في الحمض النووي التمهيدي،وعندما يكون منطقتين معرضتين للاشعاع ب طريقة صحيحة قريبتين من بعضهما يتم تضخيم التسلسل المتداخل ، النتيجة بعد فصل المواد الهلامية على جل الاغاروز هي اختلاف في البصمات عليه . العيب ال رئيسي في هذه العملية هو اعادة الاستنساخ . تركيز الاشعاع وطوله يحسن من الاستنساخ .

ميزت السالمونيلا المعزولة من خلال البصمة الناتجة من هذه العملية واظهرت النتائج العلاقة بين التشكيلات الناتجة والسلالات وكان هناك تشابه كبير في خلايا الانسان المعزولة وخلايا الحيوانات المعزولة ايضا . استخدمت هذه التقنية في تحليل سلالات معزولة من بكتيريا اليسكلوباسلس الموجودة في عصير الفاكهة حيث اظهرت النتائج انها البكتيريا السائدة بغض النظر عن الانواع المختلفة في عصير الفواكه .وكمؤشر على الاوكراتوكسين يتم تشكيل خلايا معزولة من دقيق القمح، وتم فصل سلالة ال بنيسيليوم البنسيليوم الثؤلولية في مجموعات وفقا لبصمتها، كما تم استخدام RAPD-PCR للتمييز لسلالات بنيسيليوم البنسيليوم expansum, تم عزل هذه السلالات من التفاح السليم و المتعفن, ولكن ظهرت البصمة الجينية على الرغم من الضغوط تم تصنيفها إلى مجموعتين منفصلتين، جميع السلالات من P.expansum ممثلة على أنها من الأنواع الخطرة.

مرجع كتاب
المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

العناصر المتكررة من تفاعل البوليمرات المتسلسل

يعتمد على تكرار عناصر حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي ,يتم تكرار جين الجين ال خارجي وتكرار الجين الداخلي للبكتيريا و توزيع وتكرار هذه العناصرمن الحمض النووي المتكررة يمكن دراستها مع تفاعل البوليمرات المتسلسل باستخدام بادئات موجهة ظاهريا التي هي محددة لعناصر تكرار. إذا العناصر المتكررة كانت قريبة بما فيه الكفاية لبعضها البعض، ممكن أن يحدث التضخيم في تسلسل الحمض النووي يتم فصل منتجات العناصر المتكررة باستخدام كهربائي الهلام الاغاروز . والبصمات التي يمكن الحصول عليها تدل على سلالة معينة تتمثل عناصر BOX عنصر آخر من أنواع الحمض النووي المتكرر.إذا العناصر المتكررة كانت قريبة بما فيه الكفاية لبعضها البعض، ممكن أن يحدث التضخيم في تسلسل الحمض النووي يتم فصل منتجات العناصر المتكررة باستخدام كهربائي الهلام الاغاروز والبصمات التي يمكن الحصول عليها تدل على سلالة معينة تتمثل عناصر BOX عنصر آخر من أنواع حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي المتكرر. تكنولوجيا فحص التفاعل المتسلسل متوفرة تجاريا ولا يستخدم فيها هلام الهلام وتجمع البيانات الناتجة تلقائيا وتحليلها باستخدام برنامج Diversilab المحوسب . على الرغم من اكتشاف عناصر حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي المتكررة في مجموع مورثي جينوم الكولاي والسالمونيلا الملهبة، قد وجدت هذه العناصر في وقت لاحق في عدة أنواع من البكتيريا سالبة جرام و موجبة جرام. تظهر جميع انواع الليستيريا توافق بين جينات جميع العناصر المتكررة أظهرت عملية تكرار العناصر لبكتيريا لستيريا مولدة للوحيدات اليستريا أن هناك أنواع منها ... وهذه الأنواع تكون وفقا للأصول التي تم عزلها منها.

مرجع كتاب
المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

التطبيقات

علاج الخلايا واستخراج الحمض النووي

الخطوة الأولى في عملية التحليل هي استخراج حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي (DNA) أو حمض نووي ريبوزي الحمض النووي الريبوزي (RNA) ، ونوعية العينة هي غالبا أهم عنصر لضمان استنساخ التحليل و الحفاظ على المعنى البيولوجي. وتحضير قالب الخلايا يتطلب تمزق أو تحلل الخلايا والفيروسات لتحرير حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي أو حمض نووي ريبوزي الحمض النووي الريبوزي حتى تخرج جزيئات الحمض النووي من النواة يجب أن يتم ازالة جدار الخلية عن طريق تحليله.عادة يتم اختيار ال طريقة الأمثل لتحليل الخلية بناءً على حد الكشف عن تفاعل البوليميراز المتسلسل ، السرعة، سهولة الإعداد و الطلب.فعالية هذا الاستخراج النووي تعتمد على عدد من ميزات جدار الخلية البكتيرية ،و طريقة ال معالجة المستخدمة يمكن أن تكون حرارية، كيميائية ، ميكانيكية، باستخدام المنظفات ، المذيبات ، باستخدام الانزيمات أو صدمة الضغط الإسموزي .

من السهل نسبيا في الوقت الحاضر فصل حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي بكمية و نوعية عالية الإنتاجية. معظم الخطوات المتبعة تستخدم مجموعات استخراج تجارية و اعتماداً على شبكة ال طعام يمكن أن تعطي نتائج مرضية حسب ما يتم توفيره أو بعد بعض التعديلات.هناك مجموعات استخراج تجارية مختلفة متاحة لإستخراج حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين الحمض النووي باستخدام الكيمياء الحيوية مثل د.فود(دكتور شيب بيوتك انك، مياو لي تايوان )،بريب مان)تكنولوجيا الحياة،كارلسباد،الولايات المتحدة الأمريكية) ،2001)،بيورجين(شركة أنظمة جينترا ، مينيابوليس، مينيسوتا، الولايات المتحدة الأمريكية)

فاهل والتحقيق، سان دييغو، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) جين-تراك (جين-تراك أنظمة كورب، هوبكينتون، الولايات المتحدة الأمريكية باكس كواليكون شركة، ويلمنجتون، ،(داهلينوبورج DE) (بيلي، 1998)،بروبيليا (سانوفي باستور التشخيص،مارنيس-لا-المغناج، فرنسا)، وتاكمان (تقنيات الحياة، كارلسباد، الولايات المتحدة الأمريكية)

كما تم الإعلان عن فحص تفاعلي لتاكمان للكشف عن الأنماط المصلية لفيروس الروتا في العينات السريرية و البيئية . و بعكس الحمض النووي (DNA) فإن استخراج الحمض النووي الريبوزي(RNA) أكثر اجهاداً خاصة عندما يتم استخراجه من مركب معقد أو من الأنسجة الغشائية للأطعمة الدهنية، وقد تم تطوير بعض أساليب الاستخراج التي تتوافق مع النسخ العكسي المتتابع لتفلعل البلمرة المتسلسل (QPCR) لمختلف الأطعمة. نظراً للتحلل السريع للحمض الريبوزي ( حمض نووي ريبوزي RNA )فلابد من تحليله بسرعة . الم رحلة النهائية من إعداد نموذج (عزل وتنقية الحمض النووي) يمكن استخدامها مع مركب من طرد مركزي تبايني الطرد ال مركزي المكثف والتنقية عن طريق الإستخراج اللوني باستخدام الفينول كلوروفورم، وهطول الأمطار مع الإيثانول، والعلاج مع إنزيم الأنزيمات (على سبيل المثال lizocim). ال طريقة الأكثر فاعلية ل إزالة ما تبقى من الشوائب الأخرى مع التركيز أيضا على العينة هو الاستخراج مع المذيبات العضوية و ترسيب الحمض النووي باستخدام إيثانول الإيثانول .

مرجع كتاب
المؤلف1 Dr Patricia Hernandez-Rodriguez

العنوان Polymerase Chain Reaction

الطبعة

الصفحة

سنة

الناشر intechopen

الرقم المعياري 978-953-51-0612-8

تاريخ الوصول 30, May,

المكان

اللغة الإنكليزية

العنوان بال عربي تفاعل البوليميراز المتسلسل

تفاعل البوليميرازالمتسلسل القائم على الكشف عن البكتيريا التي تنتقل عن طريق الأغذية

هناك العديد من الطرق المعتمدة على تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف عن كائن حي دقيق الكائنات الحية الدقيقة التي ورد ذكرها في الكتابات ال علمية. وهناك أيضا عدد من المقايسات المتاحة تجاريا القائمة على فحص تفاعل البلوليميراز المتسلسل التي تملك الملاءمة لتوفير الكواشف والضوابط اللازمة لإجراء الفحص والتي يبدو أن لها حساسية عالية للكشف عن تلوث كائن حي دقيق الكائنات الحية الدقيقة .

التكبير والتقدير الكمي للدنا

تشخيص الأمراض

تستخدم في الكشف عن الفايروسات في شريط الحامض الاميني

تستخدم في الادله الجنائية وقضايا تحديد النسب

تستخدم في البصمة

تستخدم لمعرفة طول شريط DNA

تستخدم لتحديد موقع جين معين ضمن سلسلة من الجينات

تستخدم في الكشف عن الطفرات الوراثية

التعديلات في التكنيك الأساسي

تاريخ

حروب براءات الاختراع

PCR tubes.png 250 أنابيب بلاستيكية يحوي كل منها على 100خ¼l من مزيج تفاعل PCR

G-Storm thermal cycler تصغير جهاز اختبار تفاعل البوليميرز المتسلسل PCR

تفاعل البوليميراز المتسلسل إنج Polymerase chain reaction هي طريقة مستخدمة بكثرة في علم الأحياء الجزيئي البيولوجيا الجزيئية . يشتق اسمه من إحدى عناصره الأساسية وهو دنا بوليميريز والذي يستخدم لتكثير و تكوين نسخ عديدة من قطعة من حمض نووي ريبي منقوص الأكسجين الحمض النووي من خلال تناسخ إنزيم ي خارج الكائنات الحية. عندما يتطور التفاعل، فإن الحمض النووي المصنع يستخدم كقالب للتناسخ. وذلك يُنشط تفاعل تسلسلي تفاعل متسلسل والذي يحدث فيه تكبير نمو أسي أسي لقالب DNA. من الممكن، من خلال هذا التفاعل عمل ملايين النسخ لقطعة مفردة من الدنا أو عدة قطع. يمكن تعديل تفاعل البوليميريز المتسلسل لعمل هندسة وراثية تعديلات وراثية عديدة.

تستخدم كل تطبيقات تفاعل البوليميريز المتسلسل دنا بوليمريز مستقر حراريا، مثل تاك بوليمريز وهو إنزيم عزل من بكتيريا بكتريا مستحرة مائية المستحرة المائية . يعمل هذا الإنزيم على تجميع خيط دنا جديد من نوكليوتيد النيوكليوتيدات (مكعبات بناء الدنا)، وذلك باستعمال خيط دنا مفرد كقالب و قليل النيكليوتيدات قليلات النيوكليوتيدات (تسمى أيضا مشرع بوادئ الدنا ) وهي مطلوبة لبدأ تصنيع الدنا. معظم طرق تفاعل البلمرة المتسلسل تستخدم مدور حراري التدوير الحراري بمعنى أنه يتم تسخين وتبريد عينة تفاعل البوليميريز المتسلسل وذلك طبقا ل سلسلة خطوات حرارية محددة.

وضعت في عام 1983 من قبل كاري موليس ، والآن هذه التقنية لا يستغنى عنها في كثير من الأحيان ويتم استخدمها في مختبرات البحوث الطبية والبيولوجية لمجموعة متنوعة من التطبيقات وتشمل هذه استنساخ DNA المتسلسل المعتمدة على الحمض النووي , علم الوراثة العرقي ، أو التحليل الوظيفي من الجينات ، وتشخيص الأمراض الوراثية ، وتحديد بصمات الوراثية (المستخدمة في علوم الطب الشرعي و اختبار الأبوة )، وكشف وتشخيص الأمراض المعدية , في عام 1993، حصل على جائزة موليس على جائزة نوبل في الكيمياء مع مايكل سميث لعمله على PCR

التعليقات

لم يعلق احد حتى الآن .. كن اول من يعلق بالضغط هنا

اعلانات

تصنيفات الموقع

شاهد أيضاً

اضيف حديثاً

اضافات مشابهه لهذا المحتوى